环氧合酶-2及特异性抑制剂对肝细胞癌VEGF表达的调节及其作用机制.pdfVIP

中文 摘 要 环氧合酶-2及其特异性抑制剂对肝细胞癌 VEGF表达的调节及其作用机制 摘 要 目的:肝癌是常见的消化系统恶性肿瘤之一，其中肝细胞 肝癌 (Thehepatocellularcarcinoma.HCC)约占90010以上， 其生物学特征为易复发、转移、预后差、病死率高。尽管目 前肝细胞癌的治疗方案 (手术切除、介入治疗、生物治疗、 射频治疗及微波治疗等)日趋完善，但仍难以取得令人满意 的疗效。因此研究肝细胞癌的发病机理以及探讨新的可行的 治疗方案具有极其重要的临床意义。 流行病学资料表明，使用非幽体类抗炎药 (nonsteroidal anti-inflammatorydrugsNSAIDs)可以降低结肠癌发生率的 400/o-50%。大量临床研究表明，MAID:能抑制结肠息肉及某 些肿瘤的生长。近年来研究表明，环氧合酶-2(cyclooxygenase. COX-2)在大肠癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、食管癌和头颈部 的鳞状细胞癌中过度表达L-O.NSAIDs可通过抑制COX-2 发挥抗肿瘤作用。COX是花生四烯酸合成PGE:的限速酶， 存在两种亚型:结构型COX-1和诱导型COX-2aCOX-l在多 数正常细胞中呈稳定表达，负责前列腺素的合成而参与生理 过程;COX一在细胞受到各种刺激因素 (生长因子、炎症介 质、致癌剂等)的诱导下合成，参与炎症、疼痛、细胞增殖、 分化、凋亡及肿瘤发生等多种病理过程。目前对于COX-2促 进肿瘤生长的机制所知甚少。新近研究表明，COX-2的表达 与肿瘤微血管生成有关[11]。肿瘤的生长和转移依赖于足够的 中文 摘 要 血液供应，因此抑制肿瘤微血管生成以治疗肿瘤己成为研究 热点。血管内皮生长因子 (Vascularendothelialgrowthfactor, VEGF)是目前发现的最重要的、特异性最强的促进血管内皮 细胞生长的细胞因子之一。本研究通过检测肝细胞癌组织中 COX-2,VEGF的蛋白表达，探讨COX-2与VEGF表达及微 血管密度 (microvesseldensity.MVD)之间的关系。同时， 通过体外实验应用COX-2特异性抑制剂NS-398对肝细胞癌 细胞株SMMC-7721进行药物干预，检测COX-2和VEGF的 表达情况，进一步在分子水平探讨 COX-2在肝细胞癌中对 VEGF表达的影响及其在肝细胞癌微血管生成中的作用。 方法:本研究应用免疫组化方法检测了45例肝细胞癌组 织、32例癌旁组织、10例正常肝组织中COX-2和VEGF的 表达，同时标记CD3;肿瘤新生血管，计算MVD。通过应用 COX-2特异性抑制剂NS-348对体外培养人肝细胞癌细胞株 SMMC-7721进行药物干预，采用逆转录一聚合酶链式反应技 术 (RTPCR)和流式细胞学技术 (FCM)，检测不同时间和 不同剂量的NS-398对COX-2,VEGFmRNA和蛋白表达的影 响。应用SPSS10.0统计软件进行统计学分析，组织标本组间 显著性检验采用单因素方差分析 (ANOVA)，组间多重比较 采用Scheffe法，蛋白表达之间的相关分析采用Pearson法， 体外抑制细胞株试验组间显著性检验采用析因设计方差分 析，P0.05为差异有显著性。 结果:1.肝细胞癌组织中COX-2,VEGF表达显著高于 癌旁组织和正常肝组织中的表达 (P=0.01,P=0.03)，有显 著性差异，具有统计学意义。肝细胞癌组织中VEGF的表达 与组织分化程度有关 (P0.05)，而COX-2的表达与组织分 2 中文 摘 要 化程度无关。肝细胞癌组织中COX-2,VEGF蛋白表达与性 别、年龄、肿瘤大小、包膜、门静脉癌栓、AFP均无显著性 差异 (P0.05). 2。对肝细胞癌组织中COX-2与VEGF蛋白表达的灰度值 分别进行相关分析，结果显示COX-2与VEGF蛋白表达之间 呈显著正相关(Pearson相关系数为0.329,P=0.011).COX-2 蛋白表达灰度值和MVD值相关分析结果显示，COX-2蛋白 表达与MVD之间呈显著正相关 (Pearson相关系数为0.319, P=0.0