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烫伤对大鼠结肠平滑肌细胞骨架影响的实验研究 摘要 目的：严重烧伤后，多数患者可能发生程度不等的肠道功能紊乱，严 重的肠道功能紊乱可导致肠道细菌移位的发生。对于其机制的研究目前主 要集中于肠道黏膜上，而作为肠道动力源的平滑肌细胞在烧伤后是否有损 伤，以及对肠道细菌移位的发生和发展有无影响，目前的研究仍然比较少； 我们根据长期的临床实践和前期研究结果推测，烧伤后胃肠动力障碍有可 能是导致细菌移位的机制之一。而对平滑肌细胞起支架作用的细胞骨架在 维持平滑肌细胞正常结构和功能中起关键作用。本实验旨在研究烫伤后大 鼠结肠平滑肌细胞骨架含量及形态的动态改变，初步探讨烧伤后胃肠动力 障碍的发生机制及由此而产生的损伤效应和意义，希望探索出导致肠道细 菌移位发生的影响因素或发病机制，并能指导临床上对烧伤患者的救治过 程，包括在创伤后疾病转归过程中不同阶段给予或免于人工介入和干预， 以及人工干预的程度、种类、方式和强度等方面的选择。方法：健康、成 年大白鼠70只，雌雄不限，体重250～300克，随机分组：正常对照组10 2、24、48小时等不同时相 只，烫伤组60只。烫伤组按烫伤后l、3、6、1 点又分为6组，每组10只。烫伤组动物称重后腹腔注射戊巴比妥钠30rag ／b麻醉，背部剃毛，制备烫伤模型：置剃毛区于92。C水浴中18s，造成 7×lOcm烫伤，烫伤后立即腹腔注射乳酸林格氏液50ml／kg复苏。正常组 动物除了不予烫伤外，其他处理同烫伤组。所有动物在相应时间点活杀后 取结肠平滑肌组织，分作两份，一份在4-6倍放大镜下将组织块仔细剔除 浆膜和粘膜，尽量只保留平滑肌组织，再次清洗后将组织块剪成1×2mm 大小，投入混合酶液(胶原酶lg／L、胰蛋白酶抑制剂lg／L、牛血清白 7．2)10ml中吹打，过滤，取细胞悬液涂片观察、计数，如此经急性酶分离 法获得结肠平滑肌细胞悬液，加入无水乙醇至浓度为70％，置4。C冰箱过 夜；清洗后加FITC标记的抗大鼠肠道平滑肌细胞骨架微丝actin抗体，避 光常温孵育30分钟，清洗，300目网过滤，调整细胞浓度为5×106／ml， 上流式细胞仪检测平滑肌细胞荧光强度。另～份做电镜照片：将组织块放 入3％戊二醛中固定10分钟，修块，在镜下选择合适的角度作超薄切片， 锇酸染色，电镜观察细胞骨架的形态分布等现象并照相。二者结合动态观 察、分析大鼠肠道平滑肌细胞在机体烫伤前后的变化。结果：实验中发现， 烫伤后大鼠肠道平滑肌细胞骨架含量先明显升高，约1小时后逐渐降低，3 小时后已明显低于正常值，随着时间的延长继续下降，大约6．12小时左右 开始渐回升，约在12．24小时间达正常水平，但仍呈上升趋势，该趋势可 延伸至48小时。这期间，大约在伤后3．12小时范围内，平均荧光强度值 始终低于正常值。各时相点烫伤组分别与正常组相比，组间差异均有显著 性(P0．01)；按时间顺序依次相邻两组比较其平均荧光强度的差异，结果 亦均具显著性(PO．01)。说明烫伤后大鼠肠道平滑肌细胞骨架含量在所取 的六个时相点上的差异有统计学意义。电镜照片显示：烫伤后细胞骨架形 态紊乱，结构破坏，分布不均：稀疏，有断裂，6—12小时后细胞骨架形态、 结构、分布等逐步向正常状态转变，48小时时接近正常。结论：1．烫伤早 期即可出现肠道平滑肌细胞骨架的改变，这～变化过程体现了机体的修复 与损伤力量抗衡的动态变化。2．肠道平滑肌细胞骨架的变化提示了烫伤后 肠道平滑肌细胞功能出现异常，如影响到肌细胞的舒缩运动、消化吸收以 及保持肠壁的紧密和通透性等功能。由此推测细胞骨架的变化可能是肠道 其它损伤的始动因素之一，参与并影响肠道细菌移位发生的过程。3．流式 细胞仪与电镜技术结合用于细胞亚结构的研究，结果稳定可靠。 关键词：烧／烫伤；肠道；平滑肌；细胞骨架／微丝；肌动蛋白／actin of theEffecton inIntestinalSmooth ExperimentStudy Cytoskeleton MuscleCellsofRatsScalded will in