分离分析化学4-3色层分析法.ppt

定性：比移值，斑点的显色特性，斑点的原位光谱扫描，与其他分析技术的联用 定量：目视比较半定量法，洗脱法（误差约为1-5% ），薄层扫描仪 瑞士CAMAG9(长玛)公司,质量优异, 价格昂贵,主流薄层色谱扫描仪为SCANNER-Ⅲ。 日本SHIMADEU(岛津) 公司销售量大,其主流扫描仪为CS-9300、CS-9301。 上海科贺生化技术有限公司是国内唯一的薄层色谱扫描仪生产厂商 TLSee薄层色谱扫描仪 全自动展开仪 ADC2(瑞士) 全自动控制薄层活化、预平衡，展开缸饱和，展开距离及干燥等所有展开步骤，实时监控并报告展开温度及湿度  一束光线的波长λS是被测物的吸收峰所在；另一束光线的波长λR是被测物不吸收的，可使由于薄层不均匀所引起的基线波动得以消除 由于斑点中被测组分的分布是不均匀的，一般是斑点中心被测组分较多，周围较少，因此采用微小光束，曲折形的扫描方式 采用背景补偿来消除铺薄层所用的吸附剂中可能含有杂质和显色不均匀性的影响 散射参数校正后吸光度和浓度之间成线性关系 4.5.6 应用技术 在医药方面的应用 聚酰胺薄膜 苯-甲醇-丁酮-甲酸（7：1：1.5：0.5）为展开剂 分离了7种黄芩中8种黄芩苷及苷元 人参皂苷的分离图谱 产品质量控制及杂质检验 四环素中差向四环素的含量应低于一定标准，因为后者毒性较大。溶四环素试样于甲醇中配成一定浓度的溶液，取一份点于硅藻土薄层上，用丙酮-氯仿-乙酸乙酯（3：1：1）的混合溶剂为展开剂展开后，用浓氨水熏，然后在254nm的紫外光下观察，除四环素主斑点外不得出现差向四环素的杂质斑。 反应终点的控制 未知物结构剖析 在薄层上分离良好的层析条件，对于柱层析是很有参考价值的。也可用薄层分离制备成品，把粗制品点在较厚、较大的制备型薄层板上分离杂质，可达到制备纯品的目的 柱色谱分离法 一、层析剂 用于色谱分离技术中的固定相或分离介质 无机基质层析剂包括：氧化铝、硅胶、活性炭、膨润土、磷酸钙(凝胶型和晶型)等。 有机基质层析剂有：琼脂糖、葡聚糖、纤维素和聚丙烯酰胺等。 层析剂 层析剂应具有下列特性： 1、不溶于流动相，且具有较好的化学稳定性和机械强度；能经受使用、清洗和再生时的各种环境条件；对于生物活性物质的分离，还必须能耐受生物降解作用。 2、具有较大的表面积和孔隙度，且粒度、孔径分布均匀。 3、有较高的回收率和负载量。 4、具有较好的热稳定性。 5、无毒性，不引起产物变性、失活。 6、成本较低，价格合理。 二、装置 蠕动泵 层析柱 检测器 流分收集器 柱层析 上样和洗脱 干法与湿 法装柱 固定相 的粒径 直径与长度 之比为1:10~1:40 柱外加夹套 层析柱 保持层析过程于低温或高于室温的温度下进行 粒径越小，理论板高值降低; 粒径越小会降低流速 极细固定相，宜用直径与长度比例大的层析柱 Rs正比于n，也正比于L; 柱长增加使流速减慢; 峰宽度σ正比于L; 柱的直径大小与板高H没有直接关系,影响柱效. 层析柱 一般情况下，柱的分离效率与柱长成正比，与柱的直径成反比，一般L/d = 20-30。 柱直径大多为2-15cm。柱径的增加可使样品负载量成平方地增加，但柱径大时，流动很难均匀，色带不易规则，因而分离效果差;柱径太小时，进样量少，且使用不便，装柱困难，但适用于选择固定相和溶剂的小试验。 色谱柱的长度与许多因素有关，包括色谱分离的方法、层析剂的种类、容量和粒度，填装的方法和填装的均匀度等。 层析柱 设计柱长时需考虑下列几点: (l)柱的最小长度取决于所要达到的分离程度，目的产物的分离程度高，分辨率低，需要较长的色谱柱。 (2)较大的柱直径需要较长色谱柱。 (3)柱越长，L/d比值越大，就越难得到均匀的填装。就目前采用的匀浆填装技术，填装长度一般不能超过50cm，而大多数色谱柱的长度在25cm，直径大时，L可长些。 4.5 薄层层析法及其实验技术 提 纲 4.5.1 技术参数 4.5.2 理论基础 4.5.3 薄层层析固定相选择原则 4.5.4 薄层层析展开剂选择原则 4.5.5 薄层层析的实验技术 4.5.6 应用技术 薄层层析法特点 薄层层 析法 快速 分离效 率高 灵敏 度高 显色方 法多 应用 面广 10-60min 塔板数高 0.01μg 4.5.1 技术参数 1) 比移值Rf 在薄层层析分离中，原点距展开剂前缘的距离为12cm，原点距展开斑点A.B的距离各为6cm.8cm。A.B两斑点的比移值各为多少？ RfA=6/12=0.50 RfB=8/12=0.67 一对斑点层析时移动距离的差值与两个斑点底宽和的比值的2倍。 2)分离度Rs 什么是相对比移值（Rf)