共表达禽流感病h5、h7亚型ha基因dna重组体构建及小鼠免疫试验研究.pdfVIP

共表达禽流感璃毒H5、H7亚型HA基因DNA晕纽体构建技小鼠免疫试验研jt——摘要 摘要 禽流感严重威胁人类健康和生命安全，危害养禽业，造成巨大经济损失，而 influenza 且目前出现了多种亚型禽流感病毒(avian virus，AIV)共存的局面。 疫苗接种仍是当前预防禽流感的重要手段。然而AIV亚型多、易变异的特点， 使传统疫苗难以发挥有效的预防作用。因此，如何设计、研制禽流感新型疫苗， 尤其是新型多价疫苗的研究是当前亟待解决的重要科学问题。所以本研究构建了 针对H5、H7亚型禽流感病毒的DNA重组体，并进行了小鼠免疫试验研究，旨 在为最终获得能同时预防多种亚型禽流感病毒的疫苗奠定基础。研究内容如下： 以一株H5N1亚型AIVmRNA为模板，采用逆转录一聚合酶链式反应 载体。通过对重组质粒的酶切鉴定及核苷酸序列测定，表明成功克隆了1株H5N1 AIV的HA全基因，克隆的基因开放阅读框(ORF)全长为l 707bp。以A／African 并将其克隆于pMDl8．T载体。该基因开放阅读框(ORF)1704bp，编码568个 进行了鉴定与体外表达研究。结果表明，成功构建了共表达H5HA—H7HA基因 的DNA重组体pIRE．H57，在Hela细胞中能表达其所携带的外源基因，所表达 的目的蛋白具有抗原性。 以BALB／e小鼠为哺乳类试验动物模型，以上述构建的DNA重组体 pIRE·H57对其进行免疫接种后，检测体液与细胞免疫指标。一研究结果表明，流 感病毒共表达DNA重组体pIRE—H57免疫组及灭活苗免疫组的小鼠均能产生特 HA抗体效价 异性抗体(与对照组相比，p005)。pIPE—H57免疫组抗H5、I{7 分别为1：6400和1：3 200，明显高于灭活苗免疫组效价(1：100～l：200) (p0．01)。pIRE—H57免疫组抗H3HA抗体效价(1：200)低于灭活疫苗免疫组 (1：12 细胞仪检测所得数据统计学分析结果表明，与灭活苗、空质粒pIREl”PD对照组 及PBS对照组比较，用所构建的DNA重组体pIRE—H57免疫的试验组小鼠的T 共表达禽流感们毒H5、H7亚型HA基因DNA季组伴构建腱小鼠免疫试验i卅)C——摘要 显著。此外，所有组的CD4+／CD8+比值均稳定在1．5～2．0之问，表明无异常免疫 应答出现。用ELISPOT检测小鼠脾淋巴细胞分泌IFN-f斑点数实验结果表明， 著增多(p0．05)。而各对照组之间差异不显著。 上述结果说明所构建的共表达流感病毒H5HA—H7HA基因的DNA重组体具 有免疫原性，为最终获得能同时预防多种亚型流感病毒的多价疫苗奠定了基础。 关键词：禽流感病毒；DNA；重组体：疫苗 ¨ 共表迓禽流感癍毒1-15、H7贬型HA垫雹DNA嚣组棒掏建艇4、鼠兔疰试验Ⅲ￡——Ah剐rael Constructionof HA ofAIVH5、H7 CO—expressgene subtype DNArecombinationandthe’immuneofmouse study Abstract Abstract：Avian influenza(Ai)hascausedCnOilnOLlSeconomiclossand for grandchallenges the health．Furthermorethereisllewsituationthat public avianinfluenzavir