糖与糖苷..pptVIP

苷元β位有取代时的苷化位移： ①苷元α-碳手性和糖端基手性都为R（或S）时， 苷化位移规律同上。 例： ②苷元α-碳和糖端基碳手性不同时，端基碳和α-碳的苷化位移值比苷元为β-无取代的相应碳的苷化位移值大约3.5ppm。 ▲酯苷、酚苷的苷化位移： 当糖与-OH形成酯苷键或酚苷键时，其苷化位移值较特殊，端基碳和苷元α-碳均向高场位移。 (在吡啶-d5中) （在甲醇-d5中测） 第七节 糖链的结构测定 多糖是生物高分子,像蛋白质一样也具有一、二、三、四级结构，多糖的生物活性不仅与一级结构有关，而且与其空间结构也有很大的关系。由于单糖的种类比氨基酸多，连接的位置也多，而且还有端基碳的构型等问题，故多糖的结构要比蛋白质复杂得多。在结构测定方面比蛋白质要困难些。 本节将重点介绍糖链的测定方法。包括单糖的组成、糖的氧环、糖与糖的连接位置和顺序、苷键的构型等。 一、 纯度鉴定 多糖是高分子化合物,其纯度不能用小分子化合物的标准来判断。即使是一种多糖纯品，其微观也并不均一。通常所说的多糖纯品是一定分子量范围的均一组分，只能代表相似链长的平均分布。 方法: 比旋度法(比旋度恒定)；凝胶柱色谱法、超离心法、高压电泳法、HPLC法； 水解法(糖组成恒定)；官能团分析法(-COOH，-NH2，-SO3H，-CHO )的摩尔比恒定 。 二、 分子量的测定 多糖: MS法、电喷雾质谱法(ESIMS);基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)、光散射法;粘度法;渗透压法、超滤法、超离心法、凝胶过滤法、HPLC法。 多糖所测得的分子量只是统计平均值，以数均分子量或重均分子量表示。 用化学法测定。先测定多糖末端再推算出数均分子量，如纤维素为直链分子，全部甲基化后再水解，因为水解产物中只有非还原端为四甲基化的葡萄糖，测定该产物在水解产物中的比例即可以求算平均链长。 三、单糖的鉴定 NMR ; 完全酸水解后采用各种色谱方法进行定性、定量分析，确定糖的种类和组成比例。PC、TLC、HPLC、GC等。 四、糖与糖，糖与苷元的连接位置 糖连接位置的测定多采用甲基化法完成，即将 被测物全部甲基化，然后水解所有的苷键，用气相色普法对水解产物进行定性定量分析。获知糖的类型，甲基化的位置及相互之间的摩尔比。通常具有游离羟基的部位即是糖的连接位点，全部甲基化的单糖即为末单糖。但仍然无法确定连接顺序。 NMR法在解决糖的连接位点中具有重要作用。 苷化位移法；MS法；13CNMR法等，不仅能推算糖的连接位点，还能够推断出糖的连接顺序。 五、糖链连接顺序的测定 早期解决糖连接顺序的方法主要是部分水解，即稀酸水解，甲醇解，乙酰解，碱水解等。将糖链水解成较小的片段。测定片段的糖链结构（包括连接顺序），再推测多糖的连接顺序结构。 质谱法和13CNMR是解决低聚糖及其苷中糖的连接顺序的有力工具。 HR FAB-MS m/z 1345.6194 [M-H]- (calcd for C61H101O32, 1345.6276) 晚香玉甙F 晚香玉甙F的1H和13C谱 晚香玉甙F的HMQC-TOCSY谱图 晚香玉甙F的HMBC谱图 晚香玉甙F 用途: (3) 可确定糖的连接位置 2mol 1mol 1mol 0mol R R R 鉴别糖的种类 如氨基糖可生成NH3 反应机理同过碘酸，但有以下几个特点：(1). 氧化能力比过碘酸强；如过碘酸在室温下不能氧化草 酸，四醋酸铅可以。(2). 立体选择性更强； 呋喃糖反式邻二羟基不反应。(3). 反应需在有机溶剂中进行； 如醋酸，二氧六环等，故不能用于多糖类化合物。 B 醋酸铅反应 2、 糠醛形成反应 糖 H+ ( 4 – 10 N), - 3 H2O R = H 五碳糖 R = CH3 甲基五碳糖 R = CH2OH 六碳糖 R = COOH 糖醛酸 反应速度和收率 △ 特点: 糠醛可与许多酚、芳胺以及具有活性次甲基的化合物缩合，形成有色物质。糖的许多显色剂就是根据这一原理配制的。常用的酸有硫酸，磷酸，三氯醋酸，草酸等。酚和胺有苯酚，间苯二酚，萘酚，苯胺，二苯胺，氨基酚，蒽酮等。 反应特点: (1). 单糖，低聚糖，多糖，苷均可反应，与Tollen,Fellin反应不同。 (2). 糖不同生成糠醛衍生物的难易就不同, 缩合产物的颜色就不同，可以用于糖的种类的鉴别。 3.羟基的反应 糖及苷的羟基反应包括醚化、酯化、缩醛（缩酮）化以及与硼酸络合反应等。 羟基的活性顺序