米根霉L-乳酸产菌株的选育及发酵条件优化.pdf

米根霉L一乳酸高产菌株的选育及发酵条件优化 摘 要 据大通量快速筛选思想和代谢控制育种理论初步建立起两种筛选方法：琼脂块一变 色乎板法和丙烯醇YPD平板法，获得乳酸产量提高的正突变株分别为4株与8株。 由后种方法获得的变异菌株HBF-12为最优突变株，该菌株产乳酸与乙醇分别为 法为高效初筛模型。 通过单因素试验和正交试验，优化菌株HBF—12摇瓶发酵条件。确定最佳发酵 面转接六代后该菌株的摇瓶生产能力比较稳定。最优条件下用7L发酵罐进行放大 实验，发酵曲线显示：与亲株相比，突变株HBF一12的乙醇产量与乙醇脱氢酶(ADH) 活力分别下降了73．6％与74％，乳酸产量与乳酸脱氢酶(LDH)活力分别提高了39．6 ％与16．2％。 针对突变株HBF-12是乙醇脱氢酶减弱型突变株，研究了米根霉中乙醇脱氢酶 的基本酶学性质：最适反应温度为25‘C；最适pH值7．5；热稳定性范围35。C以下； 酸碱稳定性范围pH6．5-7．5；zn”对酶活存在明显的激活作用，Mg“对酶活有轻微抑 10 制作用。得到该酶以乙醛为底物的米氏常数为1．750Xmol／L，NADH为底物的米 x10、1mol／L。 氏常数为2．049 关键词：米根霉 育种 L一乳酸 发酵条件优化 乙醇脱氢酶 of L-lacticacidand oryzae ScreeningRhizopusoverproducing offermentationconditions optimization Abstract As3．3461was withultraviolet Rhizopusoryzae mutagenized twokindsof N-methyl-N-nitro-N—nitrosoguanidinerNTG)together,andselecting methodswereused to screenandmetabolic accordinglargestthroughput controlling screen thatwere and theory agar-indicatorplate alcoh01．Asa and mutantstrains containingallyl result，foureight overproducing L．1acticacidwereobtained abovetwo respectivelybyusing 12“1mutant as obtainedfromthe1atter othermutants。the HBF一121 strain(named methodshowsthe L．1acticacid whichincreases30％thanthatof 88．49／L highest yield the strain．butethanoliS whichdecereases74％．Thee珩cient parent yi