核桃AFLP银技术体系的建立及指纹图谱的构建.pdf

摘 要 快捷、稳定、可靠的特点。核桃是我国重要的干果树种，由于长期实生繁殖，后代 变异大，造成单产低、商品质量混杂。我国是核桃的起源地之一，种质资源十分丰富， 存在许多特异种质资源，但是对我国核桃属植物的遗传多样性的研究非常缺乏。为 核桃的品种鉴定和种质资源保存提供依据，本研究在建立适合核桃的AFLP银 染技术体系的基础上，构建了58份核桃供试样品的指纹图谱，并对其遗传多 样性进行了分析。主要结果如下： mmol／LEDTA：1．4mol／LNaCl， 取液成份为：100 8．O)，20 mmol／LTris．HCI(pH 2％CTAB，3％PVP40，50mmol／LB一巯基乙醇，10 蛋自质，得到了浓度大，基本无降解，蛋白质和RNA去除彻底，纯度高、质量好 的核桃基因组DNA。 2．通过对内切酶用量、酶切时问、连按时间、稀释倍数等的研究，建立了 450 Buffer2 ng，NEB 2肼L，BSA0．2／tL，EcoRI(大连宝生物公司)和MseI(NEB 公司1各3U；37℃下酶切4h；加入接头后，37℃连接10h以上(或过夜)； 连接产物稀释5倍后进行预扩增；预扩增产物稀释5倍后再进行选择性扩增； 加lO“L buffer，95℃变性10rain，立即冰浴：在6％变性聚丙烯酰胺凝 Loading 胶上进行电泳分析；银染法检测PCR产物。 组合用于材料分析，共扩增出可统计条带560条，平均每对引物扩增带数为56 AFLP指纹图。 传多样性进行了分析，揭示了供试材料问遗传背景的相似性及复杂性，为核桃 的品种鉴定和产权保护，提供了理论依据。 关键词：核桃：AFLP银染技术体系；指纹图谱 TheEstablishmentofAFLP and Silver-stainingAnalysisSystem ofWalnut Fingerprinting Major：Pomology MasterGraduate：CHEN Jing Supervisor：WANG Wen-jiang Abstract anewDNAmolecularmarker AFLP(amplifiedfragmentlengthpolymorphism)is with and hasbeen accuracy．It widely techniquehighefficiency,promptitude，stability usedin of classification，cultivar identification，genetic inanimalsand targetgene plants． fora timein Walnut inChinaandhasbeencultivated Chin