农杆菌介导的B、CBF1基因对马铃薯的遗传转化.pdf

摘要 本研究以马铃薯品种东农303的脱毒微型薯为外植体，利用农杆菌介导法分别将 Bt￡ry 因和CBFI基因已转入马铃薯中．同时对影响遗传转化因素激素种类与浓度、蔗糖和琼脂 浓度、脱菌抗生素种类与浓度、共培养时间、筛选方式等进行了研究，优化了马铃薯再生 体系和遗传转化体系。主要研究结果如下： 三个月休眠期的薯块为最佳外植体生理状态，基本培养基中蔗糖和琼脂浓度分别为30eJL， 0．7％。 2利用农杆菌介导法进行遗传转化时的最适条件受所转入的目的基因影响不大，两种 基因最适的农杆菌侵染时间均为5min、菌液浓度均为OD600=0．5，此条件下的出芽率分别 为61．90％,o6s．33％，污染率较低。 3共培养时间受目的基因活性影响较大，东农303薯块与CryV基因与薯块的最佳共 培养时间为60h，CBFI基因与薯块的最佳共培养时间为36h． 4对不同产地脱菌抗生素的浓度进行了比较试验，国产头孢噻肟钠(哈药)对CryV 基因和CBFI基因的有效抑菌浓度分别为400mg／L、500mg／L．选用进口头孢噻肟钠 (invitrogen)抑菌效果较好，且在有效的抑菌浓度下对外值体无不良影响，它对CryV基 因和CBFI基因的有效抑菌浓度均为150mg／L． 5试验采用的筛选方式为延迟7d筛选，抗性选择剂为卡那霉素(IOn)，结果表明薯块 · 芽诱导阶段Kan浓度为100mg／L，生根阶段的Kan浓度为100mg／L。 6目的基因CryV试验共获得68株kan抗性植株，其中21株通过了生根筛选 果呈阳性．目的基因CBFI试验总共获得96株kan抗性植株，其中3l株通过了生根筛选 果呈阳性．证明了目的基因已整合到了马铃薯基因组中。 关键词：马铃薯；Bt基因；CBFl基因；遗传转化 TheGeneticTransformationofBtandCBF1Genesin Via Potato Abstract availablefor transformationwas A established regenerationsystem potato consideringby severial asthekindandconcentrationofdifferent and factors，such phytohormonesbactericides, theconcentrationofsucroseand time effectofselection．Inthis agar,theofco-culture，the study, andCBFI Weletransferredinto mainlocal Bt-CryV genes Dongnon9303，acultivars，with method．Thewe他microtuberdiscs．Thc Agrobacterium-mediatedexplanta transgenicplants be weretestedPCRandPCR-Sombern，andwereconfirmedto inthe by they integratedgcnome resultswere showed∞following： ofpotato．n”main