IMS-PCR测番茄细菌性斑点病种子带菌研究.pdf

摘要 厂 ＼番茄细菌性斑点病是一种严重影响番茄产量和品质的病害。这种病害由丁香假单胞 杆菌番茄致病变种(PST)引起。种子带菌是田间主要初侵染源之一．也是病害从一年传 染到下一年的原因，还是病害从一书地区传染到其它地区的原因。因此制定快速可靠灵 敏的种子带菌检测方案尤为重要。丫 本研究在中国农科院植保所国家重点实验室进行．所做的工作在国内是首次进行 的。采用两种方法制各得到两种抗原，分别对应两种注射方法，得到三种血清：抗PST 全菌体血清、抗PST2844-87血清和抗PsTl8血清。用试管凝集法涌定了所得血清的效 价：抗全苗体血清效价为640，另外两种血清效价为1280以上。用ELISA检测所获抗体 的专一性，三种血清的专一性基本相近，抗18血清交叉反应最少，抗全菌体血清交叉反 应在其次，假阳性反应最多的是抗87血清。 提取了供试74种细菌的基因组DNA．确定了检测PST的PCR条件：得到能够扩增 两个特异基因片段的引物，引物对p1、p2和引物对p3、p4。引物p3、p4扩增的基因特 异性较强，可以供检测用．而引物p1、p2所扩增的基因片段的特异性较弱，可作辅助 检测用。制备得到了具有磁心的琼脂糖微球载体，保存于4C。进行了抗血清IgG的粗提。 将上述实验结果应用于种子带菌检测。在实验中设定不同梯度的人工接菌浓度，其 中ELISA的检出临界值是l％。PCR的检出值是0．1％。 关键词番妒菌性斑点病；种子带菌；弘；抗血清：KR{ j V Abstract TomatobacterialcausedPseudomonas isa11 speck Osn by pv．tomalo syringae forthe andthe of hasbecomea in disease production tomato．It problem important qualire ofthe isthatthe is north recent disease the ofChina years．Oneimportantaspect pathogen source borneandtransmittedseedwhich servesasthe inoculum naturally by usually primery an tofind a forTBS．Soitis task OUt which important strategyrequiresrapid，reliable，and sensitiveseed-detection assays． was ofthe atIPPCAAS．Two The at nation carriedOn laboratory antigen study key