蛋白质测定的实验(陈万里).docVIP

食品科学技术学院 综合设计性实验立项申请书 课题名称：大米中蛋白质、脂肪的测定 申 请 者：陈万里 专业年级：2010级 通信地址：云南农业大学18栋480 联系电话：1座机电话号码85 E-mail：座机电话号码4@ 申请日期：2013 年 4月 14 日 研究目的意义、国内外研究现状、主要参考文献 研究目的意义：水稻是重要的粮食作物之一，其品质优劣是值得人们重视的问题。一个高产水稻品种，往往由于食味差、或营养不丰富，而不受大众的欢迎。因此，在保证高产的同时，还要改善稻米的品质。本实验将测定大米品质的几个重要生化指标，为水稻育种提供理论依据。凯氏常量定氮法：K氏微量定氮仪法 3K氏半微量定氮仪法 K氏自动定氮法水扬酸比色法紫外分光光度法双缩脲法-皮尼克法参考文献[1] 徐雪萌，王卫荣，刘国锋.结合流通环境对大米真空包装技术的研究[J].包装工程，2005，26 2 ：85～87.[2] 王颖，张蕾.不同包装方式对大米保鲜效果影响的研究[J].包装工程，2006，27 10 ：150～152.[3] 肖胜祥，龙仲安.陈化粮成因及解决方法[J].粮食科技与经济，2002， 1 ：53. 研究内容：研究几种方便实用的大米中蛋白质、脂肪等含量的测定。 预期成果：论文发表。 研究方法和进度安排： 蛋白质测定原理　　蛋白质是含氮的有机化合物。食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。4　操作方法　　4.1　样品处理：精密称取0.2～2.0g固体样品或2～5g半固体样品或吸取10～20ml液体样品 约相当氮30～40mg ，移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸铜，3g硫酸钾及20ml硫酸，稍摇匀后于瓶口放一小漏斗，将瓶以45°角斜支于有小孔的石棉网上。小心加热，待内容物全部炭化，泡沫完全停止后，加强火力，并保持瓶内液体微沸，至液体呈蓝绿色澄清透明后，再继续加热0.5h。取下放冷，小心加20ml水。放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混匀备用。取与处理样品相同量的硫酸铜、硫酸钾、硫酸按同一方法做试剂空白试验。　　4.2　按图装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水至约2/3处，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入数粒玻璃珠以防暴沸，用调压器控制，加热煮沸水蒸气发生瓶内的水。　　4.3　向接收瓶内加入10ml 2%硼酸溶液及混合指示液1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml样品消化稀释液由小玻杯流入反应室，并以10ml水洗涤小烧杯使流入反应室内，塞紧小玻杯的棒状玻塞。将10ml 40%氢氧化钠溶液倒入小玻杯，提起玻塞使其缓缓流入反应室，立即将玻塞盖紧，并加水于小玻杯以防漏气。夹紧螺旋夹，开始蒸馏。蒸气通入反应室使氨通过冷凝管而进入接收瓶内，蒸馏5min。移动接受瓶，使冷凝管下端离开液面，再蒸馏1min。然后用少量水冲洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N盐酸标准溶液滴定至灰色或蓝紫色为终点。　　同时吸取10.0ml试剂空白消化液按4.3操作。　　4.4　计算 式中：X——样品中蛋白质的含量，%；　　V1——样品消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；　　V2——试剂空白消耗硫酸或盐酸标准液的体积，ml；　　N——硫酸或盐酸标准溶液的当量浓度；　　0.014——1N硫酸或盐酸标准溶液1ml相当于氮克数；　　m——样品的质量 体积 ，g ml ；　　F——氮换算为蛋白质的系数。蛋白质中的氮含量一般为15～17.6%，按16%计算乘以6.25即为蛋白质，乳制品为6.38，面粉为5.70，玉米、高粱为6.24，花生为5.46，米为5.95，大豆及其制品为5.71，肉与肉制品为6.25，大麦、小米、燕麦、裸麦为5.83，芝麻、向日葵为5.30。索氏抽提法　　样品用无水乙醚或石油醚等溶剂抽提后，蒸去溶剂所得的物质，在食品分析上称为脂肪或粗脂肪。因为除脂肪外，还含色素及挥发油、蜡、树脂等物。抽提法所测得的脂肪为游离脂肪。操作方法.1　样品处理.1.1　固体样品：精密称取2～5g 可取测定水分后的样品 ，必要时拌以海砂，全部移入滤纸筒内。1.2 液体或半固体样品：称取5.0～10.0g，置于蒸发皿中，加入海砂约20g于沸水浴上蒸干后，再于95～105干燥，研细，全部移入滤纸筒内。蒸发皿及附有样品的玻棒，均用沾有乙醚的脱脂棉擦净，并将棉花放入滤纸筒内。2　抽提　　将滤纸筒放入脂肪抽提器的抽提筒内，连接已干燥至恒量的接受瓶，由抽提器冷凝管上端加入无水乙