蛋白质的测定36991.pptVIP

实验一 食品中蛋白质的测定 — 半自动凯氏定氮仪法 楚心唯 一、实验目的 熟悉凯氏定氮法测定蛋白质的原理 掌握凯氏定氮法测定食物蛋白的操作技术，包括样品的消化处理、蒸馏、滴定及蛋白质含量计算等。 二、实验原理 食品中的蛋白质在浓硫酸和催化剂共同加热条件下被消化分解，产生的氨与硫酸结合生成硫酸铵。碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后以硫酸或盐酸标准滴定溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质的含量。因为食品中除蛋白质外，还含有其它含氮物质，所以此蛋白质称为粗蛋白。 三、仪器与试剂 1．仪器 分析天平：感量为1mg。 定氮蒸馏装置：如右图示。 半自动凯氏定氮仪。 微量滴定管。 2．试剂 五水硫酸铜 硫酸钾 硫酸（密度为1.84 g/L） 硼酸溶液（20 g/L）：称取20 g 硼酸溶于蒸馏水中，并稀释至1000 ml。 氢氧化钠溶液（400 g/L） 称取40 g 氢氧化钠加水溶解后，放冷，并稀释至100 ml。 0.05 mol/L盐酸标准滴定溶液。 混合指示试剂：1份0.1%甲基红乙醇溶液与5份0.1%溴甲酚绿乙醇溶液临用时混合。 四、操作步骤 1．样品消化 称取固体试样0.2 g～2 g、半固体试样2 g～5 g 或液体试样10 g～25 g（约相当于30 mg～40 mg 氮），精确至0.001 g。 将称取好的样品移入已洗涤烘干的消化管中，加0.2 g 硫酸铜、6 g 硫酸钾及10 ml浓硫酸。为防止液体暴沸可在消化管内加玻璃珠数粒。 将消化管依次放入消化架各孔，然后置于消化炉上，连接好排污管。 将初始消化温度设置在380℃，打开抽吸泵水阀，使抽吸泵处于吸气状态。 接通电源，加热消化管开始消化。待消化管内样品全部炭化（约20 min），泡沫完全停止后，再加强火力 温度调至450℃ ，保持微沸继续加热40~60 min，消化至液体呈蓝绿色并澄清透明。 关闭电源，待消化液冷却后即可进行蒸馏。 同时取与样品消化相同量的硒粉、浓硫酸，与样品同时进行消化做空白试剂消化液。 2．蒸馏 依次蒸馏空白试剂消化液和样品消化液。 将冷却水进水管连接到水龙头上，打开水龙头，调节水流适中；将出水管和排水管出口端都放入水池中。 将进氢氧化钠溶液管和进水管分别放入盛有40% 氢氧化钠溶液和蒸馏水的容器中。 在250ml三角烧瓶中加入30 ml 2％硼酸和2滴～3滴混合指示剂，摇匀，接收液变为浅红色。然后将接收瓶套在接收管上后置于接收瓶托架上，调节托架的高低使冷凝管下端插入接收液液面下。 插上电源，按下定 氮仪的电源开关。仪器显示日历及其相关内容，5秒钟后显示仪器的常规状态。 将已消化并冷却的消化管套在定氮仪消化管托架上。设置加水量（10 ml）、加碱量（50 ml）及蒸馏时间6 min～8 min（可以先设置后装消化管，也可以先装消化管后设置），按下确认键。 按下工作键，仪器即开始蒸馏工作，显示屏显示蒸馏结束时，蜂鸣器鸣叫，提示本次样品蒸馏已完成。 用蒸馏水冲洗接收管出气口，然后取下接收瓶，待滴定用。 3．滴定 依次滴定空白试剂消化液和样品消化液 （1）将0.05 mol/L 盐酸标准滴定溶液装入微量滴定管中，冲洗滴定管后将液面调至“0”刻度。 （2）用0.05 mol/L 盐酸标准滴定溶液滴定接收瓶内的吸收液，滴定至吸收液由浅蓝色变成淡淡的淡红色时为滴定终点。 五、 结果计算 记录滴定时所消耗的盐酸的毫升数，试样中蛋白质的含量按以下公式计算。 纯乳与纯乳制品F为6.38 六、 结果和结论 七、讨论 * 1－电炉；2－水蒸气发生器（2 L 烧瓶）；3－螺旋夹a；4－小玻杯及棒状玻塞；5－反应室；6－反应室外层；7－橡皮管及螺旋夹b；8－冷凝管；9－蒸馏液接收瓶。 *