酰胺I带和酰胺III带测定花生磷脂酶D的α-螺旋和β-折叠含量.pdfVIP

《化学通报》在线预览版 酰胺I 带和酰胺III 带测定花生磷脂酶D 的α-螺旋和β-折叠含量 曹 栋 史苏佳 张永刚 袁凯 马雪婷 （江南大学食品学院无锡 214122 ） 摘 要 用傅立叶红外光谱对酰胺 I 带和酰胺 III 带测定花生磷脂酶 D 的α-螺旋和β-折叠含量进行了研究。结果显示， 酰胺 I 带与酰胺 III 带都可以用来测定花生磷脂酶 D 的α-螺旋和β-折叠的含量，两个谱带测定的β-折叠含量误差在 3% 以 内，α-螺旋含量的误差在 5%左右。 关键词 酰胺 I 带 酰胺 III 带 磷脂酶 D The Determination of the Contents of α-Helix and β-Sheet of Phospholipase D from Peanut by Investigating Amide I and III Regions of FT-IR Spectra Cao Dong, Shi Sujia, Zhang Yonggang, Yuan Kai, Ma Xueting (School of Food Science and Technology, Jiangnan University, Wuxi 214122) Abstract The contents of α-helix and β-sheet of phospholipase D from peanut had been determined by investigating amide I and III regions of FTIR spectra. The errors of measurements of the α-helix and β-sheet were less than 3% and around 5% respectively. Keywords Amide I, Amide III, Phospholipase D 测定蛋白质的二级结构，X-射线衍射技术是最准确和最可靠的，但它需要获得合格的晶体。因而 该技术的应用不仅工作量大，成功率低(蛋白质单晶不易获得) ，而且测定结果不易说明蛋白质在生理状 态下的构效关系。圆二色光谱(CD)法通常测定溶液状态下蛋白质的结构。核磁共振（NMR ）技术一般 测定小分子蛋白质的结构。荧光和紫外光谱只能测定蛋白质分子中少数带有发色团的氨基酸残基(如 Trp，Tyr 等) 。相比之下，傅立叶红外光谱法（FTIR ）具有其独特之处，它既可以测定液体样品,又可以 测定固体样品。将 FTIR 与去卷积(deconvolution)、二阶导数谱(Second derivative spectrum)和曲线拟合 (curve-fitting)等数学处理方法结合来研究蛋白质的二级结构，是颇有发展前景的新兴研究领域[1~9] 。对于 -1 用 FTIR 测定蛋白质分子的二级结构，研究最多的是位于 1700~1600 cm 的酰胺I 带(amide I) 。近年来， -1 [10~15] 对于蛋白质红外光谱位于 1340~1220 cm 的酰胺Ⅲ带的研究也越来越多 。本文报道用傅立叶红外光 谱对酰胺 I 带和酰胺 III 带测定花生磷脂酶 D 的α-螺旋和β-折叠含量，结果显示，两个谱带测定的 β-折 叠含量误差在 3% 以内，α-螺旋含量的误差在 5%左右。 1 材料与方法 1.1 仪器、试剂与材料 Nicolet Nexus 傅立叶红外光谱仪及水平衰减全反射(ATR)附件(美国，热电公司) ；HN 超声波发生器 (无锡华能超声电子有限公司) 。 磷脂酶 D(PLD)为 Sigma 公司产品。乙醚为分析纯且经分子筛脱水。 1.2 实验 1.2.1 pH =5.6 的