生物色谱及在中药活性成分筛选中的应用研究.pdfVIP

摘 要 本论文主要包括两部分，第一部分是以自制的接枝型硅胶为基质，制备了疏水色谱固定相， 考察了填料的色谱性能，并将其应用于胰蛋白酶的分离纯化，取得较满意的结果。第二部分是采 用羰基咪唑的方法制备了两种生物色谱固定相，分别考察了这两种填料的分离性能并将其应用于 中草药中活性成分的筛选，取得了良好的结果。 本论文分为了四个部分： 1． 以自制的甲基丙烯酸环氧丙酯(GMA)接枝硅胶为基质，采用新的化学改性方法制备了新型疏 水相互作用色谱同定相(HIC)，并用于生物大分子的分离。详细考察了其疏水特征以及初始盐浓 度、pH值、流速、温度等因素对蛋白在色谱柱上保留时间的影响；结果表明，该高效疏水作用色 谱填料的分离性能优良，基线分离六种标准蛋白，吸附容量高达36mg．g-I，详细研究了该疏水柱 的热力学性能，热力学数据可以真实地反映出蛋白质在HIC中的保留由熵控制。最后将该填料应 用于粗胰蛋白酶的纯化，纯化后的胰蛋白酶经SDS．PAGE电泳验证其纯度高达95％以上。 2． 以硅胶为基质，采用羰基咪唑法合成了人血清白蛋白(HSA)固定相，考察了HSA生物色谱 柱对小分子药物的分离性能，以及pH值和温度对小分子药物保留的影响。并用该色谱模型对铁棒 锤中活性成分进行了筛选，利用MS对筛选出的四种活性成分进行结构鉴定。从而建立了一种从 中药复杂体系中快速、高效的筛选活性成分的生物色谱方法。 3． 采用前沿洗脱的方式考察了辛克宁与固载化HSA的相互作用，发现随着温度的升高，二者的 结合位点逐渐降低，可能由于温度的升高，辛克宁与同载化HSA之间的相互作用力(色散力、静 电力和氢键力等分子键作用力)减弱，致使活性位点的减少。期望以此为其它中药活性成分与蛋 白质作用过程的研究提供一定的借鉴。 4． 用亲和层析法纯化得f12．肾上腺素受体，并将其固定于硅胶表面制备了受体色谱固定相。用前 沿色谱法测定了硫酸沙丁胺醇、重酒石酸去甲肾上腺素和盐酸普萘洛尔与p2-AR的结合常数。结 果表明，受体色谱同定相上的D2叫坻与药物的结合常数顺序与文献报道一致，说明B2一AR经过纯化、 【占|定化、装柱等操作后，依然保持其原有的活性。然后将制备的受体色谱固定相应用于丹参活性 成分的筛选。结果表明，该受体色谱同定相筛选出了丹参中与D2-AR作用的活性成分，说明该色 谱法为中药有效成分的筛选提供了一种新的技术与方法。 关键词：疏水色谱同定相，生物色谱同定相，人血清白蛋白，f12．肾上腺素受体，铁棒锤 Abstract This includestwo thefirst interaction paper parts：In part,hydrophobicchromatographicstationary were basedon silicawhichwas US．Inthescond phasesprcpar。d GMA—grarted synthesizedby part,two kindsofbio-biochromatographicstationaryphasesⅥ雌synthesizedbynew modified chemically methodsbasedon silica thesisisdividedintofivesections： macroporous gel．This 1． Based on silica new interaction glycidylmethacrylate(GMA)graftedgel，a hydrophobic newmodificationmethodanditWasusedfor chromatographicstationaryphase(HIC)waspreparedby the