植物多酚类合物抗肿瘤药物筛选及作用机制研究.pdfVIP

目 录 摘 要1 ABSTRACT2 前 言4 一 文献综述5 1.1 植物多酚类化合物抗肿瘤研究进展5 1.2植物多酚类化合物抗肿瘤作用机制9 1.2.1 诱发肿瘤细胞凋亡9 1.2.2调控细胞周期和生长信号传导通路15 1.3 结语18 二 研究路线设计20 2.1 研究目的和意义20 2.2 拟解决的主要问题20 2.3 研究内容20 2.4 实验设计思路20 三 材料与方法21 3.1 实验材料21 3.1.1 供试细胞21 3.1.2 供试化合物21 3.1.3 主要仪器21 3.1.4 其它主要试剂及耗材22 3.2 方法23 3.2.1 细胞培养23 3.2.2MTT 比色法体外抗肿瘤药物筛选23 3.2.3CCK-8 比色法体外抗肿瘤药物筛选24 3.2.4 光学显微镜观察化合物对 PC3细胞的形态学影响25 3.2.5LDH 活性测定检测化合物对细胞膜通透性的影响25 3.2.6AO/EB 双染检测细胞凋亡和供试化合物的细胞毒性26 3.2.7Hoechst33258染色检测细胞调亡27 3.2.8TUNEL 染色检测细胞调亡27 3.2.9 琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡28 3.2.10WesternBlot检测化合物对 pErk的影响28 四 结果与讨论30 4.1MTT 比色法体外抗肿瘤活性初步筛选结果30 4.1.1 部分供试化合物对 PC3细胞 72h体外抑制活性初步筛选结果30 4.1.2 部分化合物对 Bcap37细胞 72h体外抑制活性初步筛选结果31 4.1.3 部分化合物对 BGC823细胞 72h体外抑制活性初步筛选结果32 4.2CCK-8 法和 MTT 法在 PC3细胞增殖检测中的比较研究32 4.2.1 最佳测定时间的确定32 4.2.2 最佳检测波长的确定33 4.2.3 细胞数量与吸光度 OD值的关系34 4.2.4 阿霉素（ADM）对 PC3细胞的增殖影响35 4.3AO/EB双染检测化合物对 PC3细胞的毒性和凋亡诱导作用37 4.4 以 PC3细胞为研究对象对化合物 2008001和 2008003作用机理的初步研究39 4.4.1MTT 法检测化合物 2008001和 2008003对 PC3细胞的体外抑制活性39 4.4.2化合物 2008001和 2008003对 PC3细胞的形态学影响40 4.5LDH 活性测定检测化合物对细胞膜通透性的影响42 4.6Hoechst33258染色检测化合物对 PC3细胞凋亡诱导作用42 4.7TUNEL 法检测 2008003对 PC3细胞的凋亡诱导作用43 4.8 琼脂糖凝胶电泳检测 2008003对 PC3细胞凋亡诱导作用44 4.9WesternBlot检测化合物对 PC3细胞 pErk1/2磷酸化的影响45 五 结论47 致 谢49 参考文献50 附录56 原 创 性 声 明57 贵州大学 2009届硕士研究生论文 摘 要 植物多酚具有抗肿瘤、抗氧化、抗菌等多种生物活性。目前，以植物多酚为 先导化合物进行结构优化，合成活性更高的植物多酚类化合物已成为国内外研究 的热点。 本文对课题组设计合成的植物多酚类化合物进行抗肿瘤生物活性测定及作 用制初步研究，为化合物的优化设计和进一步开发提供实验依据。具体研究内容 包括： 1. 以雄性激素非依赖性人前列腺癌 PC3细胞为模型，采用 MTT比色法对课 题组合成的植物多酚类化合物进行了体外抗肿瘤活性筛选，从中筛选出植物多酚 类化合物 2008001、2008002、2008003、2008095、2008439、2008440、2008441 和 2008443，在 10 μmol/L 浓度下对 PC3 细胞作用 72 h 的体外抑制率分别为 (88.5±2.4)%、(36.0±3.8)%、(68.4±5.8)%、(67.0±6.3)%、(29.1±10.4)%、(65.5±6.8)%、 (58.5±10.6)%和(82.2±6.3)%，对 PC3细胞作用 72h的 IC 值分别为