大肠菌群检验操作规程.docVIP

大肠菌群计数检验操作规程 颁发 部门 质量部 新订■修订□复审□ 页数 共2页 文件性质 管理标准■操作标准□ 技术标准□ 文件编码 原编编码 起 草 年 月 日 审核 年 月 日 批准 年 月 日 Q 年 月 日 执行日期 年 月 日 分发 部门 质量管理部、QC 目的 建立检验的标准操作程序，使操作过程规范化。 适用范围 适用于的检验操作。 职责 检验人员 严格按检验操作规程进行检验。 QC主管 监督检查执行情况。 程序 36℃±1℃ 48h±2h 36℃±1℃ 48h±2h 图1大肠菌群 MPN计数法检验程序 6.操作步骤 6.1 样品的稀释 6.1.1 固体和半固体样品：称取 25 g 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内，8000 r/min～10000 r/min 均质 1 min～2 min，或放入盛有 225 mL 稀释液的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打 1 min～2 min，制成 1:10 的样品匀液。 6.1.2 液体样品：以无菌吸管吸取 25 mL 样品置盛有 225 mL 磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶（瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠）中，充分混匀，制成 1:10 的样品匀液。 6.1.3样品匀液的 pH值应在 6.5～7.5 之间，必要时分别用 1 mol/L NaOH或 1 mol/L HCl 调节。 6.1.4用 1 mL 无菌吸管或微量移液器吸取 1:10 样品匀液1 mL，沿管壁缓缓注入 9 mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌试管中（注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振摇试管或换用 1支1 mL 无菌吸管反复吹打，使其混合均匀，制成 1:100 的样品匀液。 6.1.5根据对样品污染状况的估计，按上述操作，依次制成十倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释1 次，换用1支 1mL无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕，全过程不得超过15 min。 6.2初发酵试验 每个样品，选择3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度接种3管月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤，每管接种1mL（如接种量超过1 mL，则用双料LST肉汤），36 ℃±1 ℃培养24 h±2 h，观察倒管内是否有气泡产生，24 h±2 h产气者进行复发酵试验，如未产气则继续培养至48 h±2 h，产气者进行复发酵试验。未产气者为大肠菌群阴性。 6.3复发酵试验 用接种环从产气的LST肉汤管中分别取培养物1环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（BGLB）管中，36 ℃±1 ℃培养48 h±2 h，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。 6.4 大肠菌群最可能数（MPN）的报告 按6.3确证的大肠菌群LST阳性管数，检索MPN表，报告每g（mL）样品中大肠菌群的MPN值。 附录A （规范性附录） 培养基和试剂附录 A.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤 A.1.1成分 胰蛋白胨或胰酪胨 20.0 g 氯化钠 5.0 g 乳糖 5.0 g 磷酸氢二钾（K2HPO4） 2.75 g 磷酸二氢钾（KH2PO4） 2.75 g 月桂基硫酸钠 0.1 g 蒸馏水 1 000 mL pH 6.8±0.2 A.1.2制法 将上述成分溶解于蒸馏水中，调节 pH。分装到有玻璃小倒管的试管中，每管 10 mL。121 ℃高压灭菌 15 min。 A.2 煌绿乳糖胆盐（BGLG）肉汤 A.2.1 成分 蛋白胨 10.0 g 乳糖 10.0 g 牛胆粉（oxgall或oxbile）溶液 200 mL 0.1%煌绿水溶液 13.3 mL 蒸馏水 800 mL pH 7.2±0.