细胞生物实验指导.docVIP

前 言 本实验指导是在龚宁所编《细胞生物学实验指导》（2003年2月）的基础上修订而成，此次修订是根据实验内容的变化进行的，删除了已经纳入《生物技术大实验》的内容，增设了微分干涉差显微镜的使用、电子显微镜演示、细胞凋亡等内容。 本实验指导编写过程中参考了杨汉民主编《细胞生物学实验》（1997年7月第二版）、李素文主编《细胞生物学实验指导》（2001年10月第一版）和中国农业大学生物学院所编《细胞生物学实验指导》（2000年4月），设置了15个实验，使用时可根据当时的具体情况选作10个。 由于编者的水平有限，本指导中难免错漏之处，恳请使用本指导的师生提出批评和建议，以便及时修改。 编 者 2007年1月3日 细胞生物学实验指导目录 实验一 细胞形态结构的观察及大小测定…………………………………1 实验二 微分干涉差显微镜的使用…………………………………………2 实验三 口腔上皮细胞的荧光观察…………………………………………4 实验四 叶绿体的提取………………………………………………………5 实验五 植物材料中DNA的提取……………………………………………6 实验六 细胞膜的渗透性……………………………………………………8 实验七 光镜下植物细胞骨架的制片技术及观察…………………………10 实验八 线粒体和液泡系的超活染色与观察 …………………………… 11 实验九 DNA的细胞化学反 实验十三 去壁低渗法制备植物染色体标本…………………………………19 实验十四 细胞凋亡……………………………………………………………22 实验十五 透射及扫描电镜演示实验…………………………………………23 实验一 细胞形态结构的观察及大小测定 一、实验目的： 1、观察几种细胞的形态结构 2、掌屋用测微尺测定细胞大小的原理和方法 二、实验原理： 测微尺分物镜测微尺（简称物微尺或台微尺）和目镜测微尺（简称目微尺），两者配合使用，可以测量细胞大小。目微尺是一个可以放在目镜内的特制玻璃园片，园片中央刻有一条直线，此线分为若干格。物微尺为一载玻片中央封固的小尺，长1mm，被等分为100格，长为0.01mm 10μm 。当测量细胞大小时，不能用物微尺直接测量细胞，而只能使用目微尺。因目微尺测量的细胞是经物镜放大后的像，而它每格所代表的实际长度随物镜的放大率而变，在测量时需要先用物微尺来标定，求出某一放大率时目微尺每格所代表的实际长度，然后再用以测定细胞大小。 将物微尺放在显微镜的载物台上，小心转动目镜测微尺，移动物微尺使两尺平行，起点线重合，然后找出另一处两尺刻度重合处，记录起点线到重合线之间的各尺的刻度数（格数），按下式计算，在该放大系统下目微尺每格所代表的实际长度： 物微尺格数 目微尺每格所代表的实际长度 ╳ 10μm 目微尺格数 例如：目微尺是100格，其对应的物微尺是80格，则目微尺每格所代表的实际长度为80/100╳10 8μm。 测量某一细胞时，如果目微尺测得其横径为5格，则此细胞横径为8╳5 40μm。 三、实验用品： 普通光学显微镜载玻片盖玻片镊子消毒牙签烧杯吸管0.9%生理盐水吸水纸。方法步骤、人口腔上皮细胞的1）、在洁净的载玻片中央，滴一滴生理盐水。 2用消毒牙签的一端，在漱净的口腔侧壁上轻轻地刮几下。 3把牙签上附有碎屑的一端，放在载玻片上的生理盐水滴中涂抹几下。4）、用镊子夹起洁净的盖玻片，将它的一边先接触载玻片上的生理盐水滴，然后，轻轻地盖在水滴上。 物微尺格数 目微尺每格所代表的实际长度 ╳ 10μm 目微尺格数 5、将制作的各种细胞临时装片置于载物台上，测定细胞的大小（包括长径和短径）。 六、注意事项： 1、制作临时装片时避免产生气泡 2、用物微尺标定的目微尺每格长度的数值代表在某一放大系统下的情况，这一数值会随物镜的放大率而改变，因此，在什么放大倍数物镜下标定的目微尺只能在同一放大倍数的物镜下测定细胞的大小。 七、作业： 1、绘出你所观察到的洋葱表皮细胞和葫芦藓叶细胞图，指出各部分的名称。 2、列表说明你所测出的几种细胞的大小。 实验二 微分干涉差显微镜的使用—— 用微分干涉差显微镜观察口腔上皮细胞 一、实验目的： 1.了解微分干涉差显微镜观察活细胞的原理 2.了解微分干涉差显微镜的特殊组件和位置 3.掌握微分干涉差显微镜的基本操作步骤 二、实验原理： 微分干涉差显微镜是根据通过物体内只分开1um或者更短距离的2束相干的光之间的相位差设计的，使标本内邻近2点的光程差被显微镜中特殊的光学系统转变为振幅（光强度）的变化。从而可以观察到标本内细微的结构，所以称为微分干涉差显微镜。根据照明方式，微分干涉差显微镜分为落射式和透视式2种，生物学和医学观察中