TLR5在不同非小细胞肺癌细胞株的表达及其活化机制的初步探讨.pdfVIP

8 · · 中国肺癌杂志2 0 15 年1月第1 8 卷第1期 Chin　J　Lung　Cancer,　Januar y　20 15,　Vol. 18,　No. 1 DOI: 10.3779/j.issn. 1009-3419.2015.01.02 ·基　础　研　究· TLR5在不同非小细胞肺癌细胞株的表达 及其活化机制的初步探讨 周辉　　罗媚　　文亦戈　　马安迪　　罗永忠　　易青　　陈建华　　肖玲 Toll 5 toll-like　receptor　5,　TLR5 【摘要】背景与目的 已有的研究表明： 样受体 （ ）在肿瘤起始和发展中发挥重 要作用。我们前期研究发现，　TLR5在非小细胞肺癌（non-small　cell　lung　cancer,　NSCLC ）组织中高表达，但其在 NSCLC高表达后的信号通路活化情况的研究并不多见。本研究旨在探讨TLR5在不同NSCLC细胞株上的表达，及其 在NSCLC细胞中活化的机制。方法 用免疫荧光、RT-PCR和Western　blot方法检测TLR5在三种不同NSCLC细胞株中的 表达。分别用0　μg/mL 、0.0 1 μg/mL、0. 1 μg/mL、1　μg/mL 、5 μg/mL、10　μg/mL 的鞭毛蛋白刺激，用NF-κB荧光素酶报 告基因质粒瞬时转染后，检测细胞内NF-κB荧光素酶的活性。选择TLR5表达最高的SPC-A- 1细胞株为实验对象，选 择0. 1 μg/mL 的鞭毛蛋白，分别用0　μg/mL 、0.0 1 μg/mL、0. 1　μg/mL 、1　μg/mL 、10　μg/mL 的TLR5抗体抑制通路活化， NF-κB TLR5 TLR5-shRNA SPC-A- 1 48　h 0. 1　μg/mL 检测细胞内 荧光素酶的活性，验证 活化通路。构建 ，转染 细胞 后，以 浓度鞭毛蛋白分别刺激SPC-A-1 SPC-A-1 0　min 10　min 30　min 60　min Western　blot 细胞及转染的 细胞，在刺激 、 、 、 ，用 方 法比较TLR5信号通路因子p-IKBα 、p-ERK 1/2 、p-JNK 、IKBα 、ERK 1/2 的变化。结果 TLR5在肺腺癌细胞株SPC-A- 1 中呈高表达，且主要表达在细胞膜上。三种细胞株中SPC-A- 1细胞NF-κB荧光素酶的活性最高，呈浓度依赖性，0. 1 μg/mL NF-κB P 0.05 SPC-A- 1细胞内NF-κB荧光素酶的活性可被TLR5 鞭毛蛋白即可明显增强 荧光素酶的活性（ ）；而 TLR5 P 0.05 0　min SPC-A- 1 p-IKBα p-ERK 1/2 p-JNK 抗体抑制，与 抗体浓度负相关（ ）。与 相比较， 细胞内 、