Meso-四(3,5-二溴-4-羟基苯基)卟啉褪色光度法测定蛋白质的研究与应用.pdfVIP

第28卷，第5期 光谱学与光谱分析 200 andSpectral May，2008 8年5月 Spectroscopy Analysis Meso一四(3，5-二溴一4一羟基苯基)卟啉褪色光度法 测定蛋白质的研究与应用 颜梅，陈 欣，张丽娜，马洪敏，孙舒婷，魏 琴。 济南大学化学化工学院，山东济南250022 4．17 质相互作用的光谱行为。发现在pH am 显著增强了体系的灵敏度：在最佳实验条件下，考察了T(DBHP)P-蛋白质体系的吸收光谱特性，于425 处蛋白质的浓度在一定范围内与吸光度A呈良好的线性关系。分别用于测定牛血清白蛋白(BsA)和卵血清 0．039 p-g·mL一。实验结果表明，该方法具有较高的灵敏度、选择性和稳定性，成功地用于牛奶样品中蛋白 质的测定，回收率为99．56％～100．2％，相对标准偏差低于2．2％。从而建立了一种测定蛋白质的灵敏方法 并用于食品分析领域中。另外考察了离子强度及温度对体系的影响。 关键词蛋白质；光谱探针}二溴羟基卟啉；微乳液；光谱行为 中图分类号：0657文献标识码：A 文章编号：1000-0593(2008}05—1149—04 比许多其他吸光光谱探针，这种探针具有灵敏度较高、反应 引 言 时间短以及稳定性较好等优点。 蛋白质是生命体中最基本的成份，在血清中蛋白质的增 1实验部分 加或减少显示了人体健康状况[1。3]。蛋白质的定量分析在很 多领域里非常重要，例如生物化学、免疫诊断学以及临床分 1．1仪器与试剂 析。测定蛋白质的传统方法较多，例如Ix)wry分析法[4]，它UV-3000型紫外一可见分光光度计(13本岛津)。 0 是基于由酪氨酸和色氨酸形成的有色复合物，但是这种方法 BSA和Ova标准溶液：分别准确称取0．010gBsA和 OVa(济南爱博经贸有限公司)，加入少量二次水溶解后分别 仅适用于测定蛋白质浓度大于10mg·mL-1的体系；Brad— ford分析法[5]是基于考马斯亮蓝与蛋白质结合的原理，但是转移至100mL容量瓶中，定容，摇匀，于4℃下储存。此标 有污染容器的缺点；银着色法[6]具有步骤繁琐的缺点。而染 准溶液分别含BSA和OVa为100／lg·mL～． 5 料探针分光光度法克服了上述方法中的缺点，在蛋白质分析 T(DBHP)P：称取0．006gT(DBHP)P，用N，N．二甲 中有着较高的灵敏度[7-93。 基甲酰胺(DMF)溶解，并用DⅧ定容于50mL容量瓶中， mol·L-1。 卟啉作为显色剂或指示物质广泛用于金属离子及生物大 浓度为1．0X101 分子的分析测试中1-10-]3]，mg$o--四(3，5溴-4-羟基苯基)卟Tween-80微乳液：按照微乳液中各组分的质量比为 啉[T(DBHP)P]是一种含有吸电基团溴的对称性卟啉，已经 用于金属离子和核酸的光度分析中D4-1s]，但未见其用于蛋白制，将各组分混合均匀后，即可得到所需的微乳液。 质的分析。在本实验中，T(DBHP)P作为分光光谱探针被用BR缓冲溶液：分别配制0．2mol·L1的氢氧化钠和