禽呼肠孤病毒S1733株单克隆抗体的制备及特性鉴定.pdfVIP

中国畜牧兽医 2012年第39卷第1l期 生物技术 ·47· 谢志勤，谢芝勋，刘加波，庞耀珊，邓显文，谢丽基，彭宜，范晴 (广西壮族自治区兽医研究所，广西畜禽疫苗新技术重点实验室，广西南宁 530001) 摘要：将增殖的禽呼肠孤病毒S1733毒株进行浓缩，然后进行蔗糖梯度纯化，测定纯化后病毒的浓度，按每只鼠100肚g的 选，阳性孑L经3次有限稀释法克隆。通过间接EI，IsA方法测定抗体效价，并通过western 和中和反应等方法对2株单克隆抗体特性进行检测。试验结果表明，纯化的病毒含量为43mg／mL，用纯化的病毒免疫 BALB／c小鼠后与骨髓瘤细胞融合，通过克隆筛选成功获得2株能稳定传代并分泌抗禽呼肠孤病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞 株sF63K3和sB2 与其他病毒株没有交叉反应，具有良好的特异性，并且这2株单克隆抗体没有中和禽呼肠孤病毒的能力，具有识别禽呼肠孤病 毒的能力，可以用于禽呼肠孤病毒的特异性检测。 关键词：禽呼肠孤病毒；单克隆抗体；制备；鉴定 9．4 中图分类号：S852．651 文献标识码：A 文章编号：167卜7236(2012)11一0047一05 禽呼肠孤病毒(avianreovirus，ARV)是严重危异性单克隆抗体，并对其生物学特性进行鉴定，为建 害商品雏鸡的病毒之一，属于呼肠孤病毒科，呼肠孤 立一种敏感、特异、快速、简便的ARV临床检测方 病毒属，是双股RNA病毒，其基因组有10个节段，法奠定基础。 由大(L)、中(M)和小(S)3组基因组成。主要症状 1材料与方法 为鸡病毒性关节炎和腱鞘炎，表现为雏鸡关节肿大、 ARV 1．1 菌株 S1733毒株由美国康州大学 腱鞘炎、站立不稳、吸收障碍综合症、矮小综合症和 Khan博士惠赠；骨髓瘤细胞SP2／o由美国宾夕法 呼吸道病等，由于鸡受感染后，抵抗力下降，很容易 尼亚州州立大学动物诊断中心Dr。Lu教授惠赠； 继发其他疾病的感染而导致死亡，最终造成严重的 经济损失(卡尔尼克，1999)。目前，对禽呼肠孤病毒 疫苗新技术重点实验室分离鉴定并保存；对照毒株 的检测已建立了很多方法，主要有中和试验、琼脂扩 散试验、ELIsA(谢芝勋等，2007；秦春香等，2009)、 RT—PcR(廖敏等，2003；Motitschke等，2010)和荧 氏囊病毒(IBDV)由畜禽疫苗新技术重点实验室 光定量RT—PCR(Guo等，201l；罗婵等，2009；熊文 保存。 婕等，2010)等，但这些检测方法大都存在试验操作1．2试验动物SPF种蛋购自北京梅里亚维通公 繁琐、费时等不足。而基于单克隆抗体(McAb)而 司，经畜禽疫苗新技术重点实验室于37℃严格无菌 建立的免疫检测技术，由于具有特异性强和敏感度 孵化，供病毒增殖用；BALB／c小鼠购自广西医科大 高的优点，在疾病诊断方面已得到了广泛的应用。 学实验动物中心。 目前，未见有应用ARVs1733毒株制备单克隆抗 1_3主要酶与剂试 预染低分子质量蛋白质 体的报道，本研究利用杂交瘤技术制备抗ARV特 MarkersⅢ购自天根生物公司。弗氏完全佐剂、弗 氏不完全佐剂、胎牛血清、1640改良培养基、细胞融 2 04一05 收稿日期：201 作者简介：谫i志