总RNA纯化试剂盒说明-中文版.docVIP

总RNA纯化试剂盒 产品说明书 此款RNA纯化试剂盒提供了一种从培养的动物细胞、组织样品、血液、细菌、酵母、真菌、植物和病毒中快速提取和纯化总RNA的方法，。该试剂盒可以纯化所有大小的RNA，从大的mRNA和核糖体RNA到小RNA（microRNA或miRNA）和小干涉RNA（siRNA）。RNA优先从蛋白等的细胞组分中纯化出来，而不使用抑制的苯酚或者氯仿。纯化的RNA是高度完整的，可以应用到一系列的下游应用试验中，包括实时PCR，Northern免疫印迹分析，RNase保护实验和引物延伸，以及表达芯片分析。 纯化技术 纯化的基础是旋转柱色谱法，用特有的树脂作为分离介质。RNA优先从其他细胞组分（如蛋白质）中分离出来，而不使用苯酚或者氯仿。纯化步骤包括首先用合适的裂解液融解细胞或组织，然后裂解液中加入乙醇后上样到旋转柱中。树脂结合RNA是基于离子的浓度，所以只有RNA结合到柱子上而所有剩余的蛋白和其他的污染物会在流动液中而被除去或者仍在树脂的顶部。然后结合的RNA用试剂盒提供的洗涤液洗涤以除去所有残余的杂质，然后纯化的总RNA用抽提缓冲液洗涤。纯化的RNA是高度完整的，可以用于一系列的下游实验分析。 说明 试剂盒说明书 柱子结合容量 50 μg 柱子最大上样体积 600 μL 纯化RNA大小 所有大小，包括小RNA（200nt） 起始材料最大量 动物细胞 动物组织 血液 细菌 酵母 真菌 植物组织 3×106个细胞 10mg（对于大部分组织*） 100μL 1×109个细胞 1×108个细胞 50mg 50mg 完成10次纯化时间 20 min 平均收率 HeLa细胞（1×106个细胞） E.coli（1×109个细胞） 15 μg 50 μg 优点 ? 使用旋转柱提取，步骤快且简单 ? 提取总RNA，从大的核糖体RNA（rRNA）到小（RNAmicroRNA或者miRNA) ? 不需要苯酚或氯仿作提取液 ? 从多种种类来源样品中提取高质量的总RNA ? 可以提取和检测到的RNA组织样品可以小到单个动物细胞 试剂盒成分 成分 50 preps 裂解液 40 mL 洗涤溶液 22 mL 抽提缓冲液 6 mL 微型旋转柱 50 收集管 50 抽提管(1.7 mL) 50 产品说明书 1 储存条件和产品稳定性 所有的溶液需在室温密闭保存。所有的试剂在不开封条件下稳定保存１年。 预防措施和警告事项 该试剂盒只为科研目的设计，不可用于人或者临床。 要确保有合适的实验服，在操作化学试剂时一次性的手套和护目镜会磨损。需要更多信息，请参考适合的材料安全表（MSDSs）。 所有人和动物组织的问题是要考虑到潜在的感染。当操作全血样品时，所有在使用国家的有关当局建议的预防措施都要执行。 用户自备试剂和设备 你需要有以下所需材料才可以使用总RNA纯化试剂盒 对于所有材料的实验步骤 ? 台式离心机 ? 95 - 100% 乙醇 ? β-巯基乙醇 对于动物细胞实验步骤 ? PBS（无RNase） 对于动物组织的实验步骤 ? 液氮 ? 研钵和研杵 ? 70% 乙醇 对于鼻喉抹片样品的实验步骤 ?无菌，一次性抹片 对于细菌的实验步骤 ? 含溶菌酶的TE缓冲液 对于革兰氏阳性细菌，在TE缓冲液中1mg/mL 溶菌酶 对于革兰氏阴性细菌，在TE缓冲液中3mg/mL 溶菌酶 对于酵母的实验步骤 ? 含有溶细胞酶的重悬浮缓冲液 50mM Tris pH 7.5 10mM EDTA 1M 山梨糖醇 1 单位/μL 溶细胞酶 对于真菌的实验步骤 ? 液氮 ? 研钵和研杵 ? 70% 乙醇 对于植物的实验步骤 ? 液氮 ? 研钵和研杵 ? 70% 乙醇 RNA的操作 RNase是降解RNA的稳定性和活性很强的酶。高压灭菌的溶液和玻璃器皿总是不能有效除去这些酶。所以当操作RNA准备工作的第一步就是有一个无RNase的环境。下面这些预防措施是推荐的针对这些酶最好的措施。 ? 操作RNA的地方需远离微生物实验地方 ? 干净的、一次性的手套在拿放试剂、样品、移液管、一次性离心管等时会损坏。因此建议经常更换手套以避免污染 ? 需要有RNA专用的溶液、枪尖、实验服、移液管等用具 ? 所有的RNA操作用到的溶液都应用至少0.05%DEPC处理的高压灭菌水或者用分子生物学指定的无RNase水配制 ? 用商用的除RNase的溶液清理表面 ? 当使用提纯的RNA样品时，在用于下游实验过程中确保其在冰上放置 流程图 用总RNA纯化试剂盒纯化RNA的实验步骤 实验步骤 所有的离心步骤都用台式离心机完成。不同的步骤需要不同的转速，所以请查看你的离心机的说明书以保证其能提供合适的转速。所有的理性步骤都在室温进行。准确的rpm转速可以用下面的公式计算：