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2015-09-16 发布于山西
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分子生物学研究技术分子生物学研究技术柴团耀柴团耀中国科学院研究生院中国科学院研究生院 tychai@gsucas.ac.cn tychai@gsucas.ac.cn 1 1 第一章第一章分子克隆的工具酶和载体分子克隆的工具酶和载体 2 2 第四节质粒DNA的提取和纯化第四节质粒DNA的提取和纯化 3 3 从细菌中提纯质粒DNA有多种方法，从细菌中提纯质粒DNA有多种方法，但是都包含以下3个步骤：但是都包含以下3个步骤： 1）细菌培养物的生长。 1）细菌培养物的生长。 2）细菌的收获和裂解。 2）细菌的收获和裂解。 3）质粒DNA的纯化。 3）质粒DNA的纯化。 4 4 一、细菌培养物的生长一、细菌培养物的生长从琼脂平板上桃取一个单菌落，接种从琼脂平板上桃取一个单菌落，接种到培养物中（在含有适当抗生素的液体培养基中生到培养物中（在含有适当抗生素的液体培养基中生长），然后从中纯化质粒。长），然后从中纯化质粒。小量制备：单菌落接种到少量培养基中（常用3mL）培小量制备：单菌落接种到少量培养基中（常用3mL）培养至对数生长后期（一般过夜），部分培养物用于小量养至对数生长后期（一般过夜），部分培养物用于小量制备质粒。制备质粒。大量制备：取上述过夜培养物作为大量培养的接种物，大量制备：取上述过夜培养物作为大量培养的接种物，扩大培养。培养时间和生长情况主要依赖于质粒DNA的扩大培养。培养时间和生长情况主要依赖于质粒DNA的拷贝数以及其复制是松弛型或严紧型。拷贝数以及其复制是松弛型或严紧型。 5 5 • 表1.3 • 表1.3 6 6 二、细