甲氧基有机磷杀虫剂广谱特异性抗体的制备.pdfVIP

第36卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第5期 Chinese of 647—652 2008年5月 Journal AnalyticalChemistry 甲氧基有机磷杀虫剂广谱特异性抗体的制备 梁颖1’2 刘媛2 祝金凤2 樊明涛¨ 刘贤进+2 1(西北农林科技大学食品学院，杨陵712100)2(江苏省农科院食品质量安全与检测研究所，南京210014) 摘要以通用结构O，O一二甲基硫代磷酸酯为目标检测基团，制备针对甲氧基有机磷杀虫剂的广谱特异性 抗体。利用O，O一二甲基硫代磷酸钠和氯乙酸合成半抗原5-羧甲基．O，O．二甲基二硫代磷酸酯(CMP)，通过 有机溶剂种类及含量、pH因素对ELISA曲线的影响，确定CMP酶联免疫分析方法(ELISA)的最佳工作条件， 叉反应，测定结果表明：抗体对马拉硫磷、稻丰散、乐果、亚胺硫磷、倍硫磷、甲基嘧啶磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷 850．21∥L。该技术可用于多种甲氧基有机磷杀虫剂的快速定性或半定量检测。 关键词甲氧基有机磷，杀虫剂，广谱特异性抗体，酶联免疫分析(EHSA) 1 引 言 有机磷杀虫剂具有杀虫谱广、活性高、残留量低等特点，在农业、林业和卫生业等领域得到了广泛应 用。近年来，随着一批高毒农药的禁用，有机磷杀虫剂在我国的使用量愈加增大，在农产品中残留的有 机磷杀虫剂危害到了消费者的食用安全。目前，有机磷杀虫剂残留已成为我国食品安全中最突出的问 题之一，亟需建立一种快速高效的检测方法。已建立的有机磷杀虫剂免疫检测方法主要是针对甲基对 硫磷¨力J、杀螟硫磷H1和倍硫磷垆1等单药的检测，但是食品中总是多种农药同时存在，采用广谱特异性 抗体建立的检测方法可以达到快速、全面筛选的目的MJ。目前仅有针对乙氧基有机磷农药】、拟除虫 菊酯类农药哺．91以及包括毒死蜱、三唑磷、克百威等在内4种农药的广谱特异性抗体制备的研究和报 道【l0。。甲氧基有机磷农药通用结构半抗原设计及广谱特异性抗体制备尚未见报道。本研究以甲氧基 有机磷杀虫剂通用结构O，O一二甲基硫代磷酸酯为目标检测基团，设计、合成半抗原并制备针对甲氧基 有机磷杀虫剂的广谱特异性抗体，为建立快速、高效的检测食品中有机磷杀虫剂方法奠定基础。 2实验部分 2．1仪器与试剂 AVANCE 640型紫外-可见分光光度计(美国Beckman公司)；l 心机(德国Eppendorf公司)；MK2酶标仪(芬兰Labsystem公司)；Wellwashplus全自动洗板机(美国 司)；-S拉硫磷、稻丰散、乐果、亚胺硫磷、倍硫磷、甲基嘧啶磷、甲基对硫磷、杀螟硫磷、杀扑磷、氧乐果、 敌敌畏、久效磷、甲胺磷、乙硫磷农药标样，纯度大于99．75％(农业部药检所)，其余试剂均为分析纯。 新西兰大白兔(江苏省农科院实验兔场)。 2007-09-26收稿；2007-1l-19接受 本文系国家科技支撑计划(No．20068AK02A04)和863计划(No．2006AA062411)资助项目 ·E·mail：mingtaofan@tom．com；4-：E·mail：jaasliu@jaas．at．．cn 万方数据万方数据 分析化学 第36卷 2．2半抗原合成与鉴定¨lJ mL三颈瓶中依次加入0．95 在50 g(0．01m01)氯乙酸、10mL氯仿和1．5mL水，搅拌溶解。62℃ 水浴回流，4g45％的0，0一二甲基硫代磷酸钠水溶液(O．01t001)通过恒压漏斗缓慢滴入三颈瓶中，滴加 时间不低于45min。滴加结束后，继续搅拌回流30 rain。反应结束后，反应液冷却至室温，静置分层。 水层分别用2mL氯仿萃取3次。合并氯仿层，用2 mL水反萃取后弃去水层。氯仿层用无水MgSO。干 燥