诱变物质的微核测试与其应用.pptVIP

本文观看结束！！！ * 设计性实验 小组成员：黄金汇 魏青 卞徐磊 唐晓婧 刘欣欣 周伟 徐振扬 2008年10月 生技0611 第5组 本实验通过用实验室自来水（对照组）、洗涤剂、新校区河道污水、一定范围内不同浓度的硫酸铜溶液处理蚕豆根尖，通过观察计数后计算蚕豆根尖细胞微核千分率得出样品溶液污染指数。 摘要 结果表明：七种处理液处理后的蚕豆根尖细胞的微核千分率分别为2.00‰、2.67‰、4.67‰、3.67‰ , 4.00‰，5.33‰，6.33‰ 六种样品污染指数分别为1.33，2.33，1.83，2.00，2.67，3.17。这表明学校新校区存在中度污染，应注意环境的保护。 前言：随着科技的飞速发展，不断有新的化学物质和“工业三废”进入我们的生活，它们中许多都是“致畸、致癌、致突变”的物质，可以对人类健康产生巨大的威胁。微核试验(micronucleus test，MCNT)是以动植物为材料，观测材料细胞出现的微核率来表示材料受遗传损伤程度从而检测遗传毒物的一种方法。在各种微核实验中，常采用蚕豆(vcia faba)根尖细胞微核法，蚕豆根尖细胞微核试验(Mircronu—cleus test，简称MCNT)技术是一种以染色体损伤及纺锤丝毒性等为测试点的植物微核检测方法，此可用微核率大小来表示诱变因子的强弱。我国科学家陈光荣在I983年开始用蚕豆根尖微核技术(Vicia MCN)来检测农药和化学诱变剂对染色体的损伤情况。目前利用蚕豆初生根尖微核技术监测环境污染和危险化学品的研究已得到了广泛的应成为我国水环境监测的规范化方法之一[2]；利用蚕豆根尖细胞微核技术以下优越性：方法简便，鉴别客观，易于掌握，不需要特殊的仪器和药品，敏度高，可靠性强；而且有显而易见的实用性，且蚕豆根尖细胞周期中大部分时间处于对诱变剂敏感的间期，便于遗传毒性检测试验，精确度也比较高，现已广泛地应用于污水的检测。本实验就是利用蚕豆根尖微核检测技术对新校区河道污水水质污染，生活用品，化学用品的情况进行评价。 关键词： 蚕豆 微核 污染指数 一、实验目的： ☆了解细胞微核形成的机理及其形态特点 ☆学习植物根尖细胞的微核测试技术 ☆进行小组合作，掌握设计实验基本能力 正文 : 实验设计 ，实验过程等 二、实验原理： 微核是真核细胞中的一种异常结构，往往是细胞经辐射或化学药物的作用而产生。在细胞间期微核呈圆形或椭圆形，游离于主核外，大小应在主核1/3以下，微核测试是一种以染色体损伤及纺锤丝毒性等为测试点的微核检测方法，用微核率大小表示诱变因子强弱，经证实微核率大小和用药的剂量或辐射累积效应呈正相关。 三、实验材料：蚕豆 实验用具和药品： ●显微镜、载玻片、盖玻片、培养皿、滤纸、电子天平、试管、镊子、 广口瓶、脱脂棉等； ●无水乙醇、冰醋酸、改良石炭酸品红染液、HCl等； ●洗涤剂，新校区河道污水、硫酸铜。 四、实验过程： 1.浸种催芽（10月1日-6日） 选择无虫、饱满、大小均匀的蚕豆种子40粒放入盛有自来水的培养皿中， 25℃浸泡24h,其中换水2次。种子吸胀后，在培养皿中铺一层脱脂棉，倒入少量自来水，将种子置于其中培养5天，大部分初生根长至1～2cm左右。 2.处理液的配置 ◇对照组自来水直接由实验室取得； ◇配制12.5mg/L,25mg/L,50mg/L,100mg/L四种浓度的硫酸铜溶液； ◇取洗涤剂稀释5倍备用； ◇取新校区河道污水稀释5倍备用。 四、实验过程： 3.处理（10月7日12：30-16：30） 用上述七种处理液处理根尖，每一处理选取4-5粒初生根良好、根长较一致的种子，置于盛有被检测液的培养皿中，被测液浸没根尖即可，贴上标签，处理4h。 4.根尖细胞恢复培养（10月7日17：00-10月8日16：00） 处理后的种子用蒸馏水浸洗三次，每次2～3分钟。洗净后置于铺有脱脂棉的培养皿中，加自来水于25℃恒温箱中恢复培养23h。 5.根尖细胞固定（10月8日16：30-10月9日13：30） 将恢复培养后的种子，从根尖顶端切下1cm长的幼根放入广口瓶中，以无水乙醇：冰醋酸=3：1的比例配制卡诺氏固定液，倒入广口瓶进行固定21h。 四、实验过程： 6.解离、染色、压片 用蒸馏水浸洗固定好的幼根两三次，每次3分钟，吸去蒸馏水，加入1mol/L盐酸将幼根浸没，于60℃水浴解离20分钟，幼根软化即可。然后吸去盐酸，用蒸馏水浸没清洗幼根三次，每次1～2分钟。在凹面玻片内滴加改良石炭酸品红染液，染色10分钟，制片前取出置载玻片上，截下1～2mm左右长的根尖，滴改良石炭酸品红染液，加上盖玻片，覆一层吸水纸，用解剖针或镊子垂直敲打，然后以拇指垂直紧压