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实验三、蛋白质的沉淀反应 1、实验目的 熟悉蛋白质的沉淀反应 进一步掌握蛋白质的性质 2、实验难点与重点 2.1蛋白质沉淀的方法有哪些 2.2蛋白质沉淀反应的原理 3、实验原理 蛋白质胶体溶液稳定的因素:水化膜、表面电荷 加入适当试剂使蛋白质分子处于等电点状态或失去水化层，或者与某些试剂结合成不解的盐后，蛋白质的胶体溶液就不稳定，并将产生沉淀。 改变蛋白质表面的水化层及电荷的主要途径有： 改变溶液的离子强度 改变溶液的pH 改变溶液的介电常数 改变溶液的温度 蛋白质沉淀可逆与不可逆的区别 能使蛋白质沉淀的试剂有： 高浓度中性盐 （NH4)2SO4、Na2SO4、NaCl（中和蛋白质的电荷，可逆） 这种加入盐使蛋白质沉淀析出的现象称为盐析，用于蛋白质分离制备 有机溶剂 丙酮、乙醇 (破坏蛋白质水膜，用于在提取DNA等时去除蛋白质，冰浴条件沉淀蛋白质短时间内是可逆的，否则不可逆) 重金属盐 Hg2+、Ag+、Pb+ （与蛋白质中带负电荷时，形成不易溶解的盐,或改变蛋白质的空间结构） 生物碱试剂沉淀：三氯乙酸，苦味酸，钨酸等（必须在溶液pH大于pI时，蛋白质带正电荷，可以与生物碱试剂结合） 加热变性沉淀：豆腐 等电点沉淀：Glu的生产 4、实验步骤 5、原始数据 6、问题 6.1、蛋白质发生沉淀的主要原因是什么？何谓可逆沉淀和不可逆沉淀？蛋白质变性一定沉淀？沉淀蛋白质一定是变性的吗？为什么？ 6.2、蛋白质的沉淀反应有何用途？ * 蛋白质溶液1ml NaCl晶体少许，溶解，95%乙醇2ml 加入 混匀 观察沉淀产生 加水 沉淀是否溶解？ 需要先加蛋白质溶液，再加饱和硫酸铵，否则清蛋白与球蛋白会同时析出 除去球蛋白 加多变成盐析，作用中和电荷，加速沉淀 蛋白质溶液5 ml 加入5 ml 饱和硫酸铵溶液 加入 微微摇动，静置数分钟 观察沉淀产生为球蛋白 过滤 滤液中加硫酸铵粉末 析出清蛋白，加水 沉淀是否溶解？ 操作注意点：如加入硫酸铵粉沫过量，会有硫酸铵晶体出现，要与蛋白质沉淀区分开来。 蛋白质溶液2 ml 加入1%醋酸4-5滴，加入5%鞣酸数滴 加入 混匀 沉淀？ 加水 沉淀是否溶解？ 蛋白质溶液2 ml 加入1%醋酸4-5滴，加入饱和苦味酸数滴 加入 混匀 沉淀？ 加水 沉淀是否溶解？ pH大于pI pH小于pI时带正电荷 蛋白质溶液2 ml 加入1%醋酸铅，至有沉淀出现 加入 加水 沉淀是否溶解？ 蛋白质溶液2 ml 加入1%硫酸酮，至有沉淀出现 加入 加水 沉淀是否溶解？ 沉淀是否能溶解 是否产生沉淀 6 5 4 3 2 1 管号 * * *
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