实验一蛋白质的等电点测定和沉淀反应.pptVIP

实验一、蛋白质的等电点测定和沉淀反应 一、目的 1.了解蛋白质的两性解离性质 2.学习测定蛋白质等电点的一种方法 3.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识 4.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义 二、原理 蛋白质是两性电解质。在蛋白质溶液中存在下列平衡： 等电点:当溶液的pH达到一定数值时，蛋白质颗粒上正负电荷的数目 相等，在电场中，蛋白质既不向阴极移动，也不向阳极移动，此时溶液的pH值称为此种蛋白质的等电点。 四、操作步骤 （一）酪蛋白等电点的测定（1）取同样规格的试管4支，加入各试剂，然后混匀。此时 4个管的pH依次为5.9、5.5、4.7、3.5。 （2）各加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL， 加一管，摇匀一管。观察其混浊度。静置10分钟后，再观察其混浊度。最混浊的一管pH即为酪蛋白的等电点。  （二）蛋白质的沉淀及变性1、蛋白质的盐析 蛋白质的盐析: 无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才能析出。 盐溶:由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的盐析作用是可逆过程。 于试管中加入蛋白质溶液5mL ，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解，为什么？将管内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止。此时析出沉淀为清蛋白。取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。 2、重金属离子沉淀蛋白质 重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加3%硝酸银溶液1—2滴，振荡试管，有沉淀产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？为什么？ 3、某些有机酸沉淀蛋白质 取1支试管，加入蛋白质溶液2mL，再加入1ml5%三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。放置片刻倾出清液，向沉淀中加入少量水，观察沉淀是否溶解。 4、有机溶剂沉淀蛋白质 取1支试管，加入2mL蛋白质溶液，再加入2mL95%乙醇。观察沉淀的生成（如果沉淀不明显，加点NaCl，混匀。 5、乙醇引起的变性与沉淀 取3支试管，编号。依下表顺序加入试剂 五、注意事项 等电点测定的实验要求各种试剂的浓度和加入量必须相当准确。 六、实验报告 以表格形式总结实验结果，包括观察到的现象，分析评价实验结果。 七、思考题 1、什么是蛋白质的等电点？ 2、在等电点时，蛋白质溶液为什么容易发生沉淀？ * * 1.向各管内加水4ml，在2，3管内各加一滴甲基红 2.第二管中用0.1mol／L醋酸溶液中和。第三管用0.05mol/L碳酸钠溶液中和，观察各管的颜色变化和沉淀生成 3.每管再加0.1mol/L盐酸溶液数滴，观察沉淀的再溶解