多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征.pdfVIP

934-938 一 誊怯HER三引TAs饵翻nn蛊2007年-．8,qSSNlWW． ． cn’2吼8F chinagene 研究报告何炭j孑良苗 DOI：10．1360／yc-007-0934 多重实时荧光PCR相对定量法快速诊断唐氏综合征 袁海昕1，吴燕1，刘敬忠1 1．首都医科大学附属北京朝阳医院基础医学研究中心。北京100020； 2．福建医科大学细胞生物学与遗传学系，福州350004； 3．中国医学科学院中国协和医科大学基础医学研究所医学遗传室，北京100005； 4．北京大学第一医院中心实验室。北京100034 摘要：为了建立一种基于多重实时荧光相对定量PCR技术并应用之于唐氏综合征分子诊断，选择21号染色体 参照基因，设计合成两对引物以及分别以不同荧光标记的TaqMan探针，在同一个反应管中进行扩增。以相对 定量指标ACT值区分唐氏综合征患者与正常人．采用EB病毒转化技术，把唐氏综合征患者外周血B淋巴细 胞转化成永生淋巴母细胞系作为标准品。通过优化反应条件，使得目的基因和参照基因的扩增效率基本一致， ng／IxL时，变异系数最 接近100％，模板浓度在3～300ng／lJL范围内，ACT值的变异系数小于15％，浓度在30 小(10％)。以该浓度的DNA作为模板进行批内和批间实验的ACT值重复性好，变异系数分别为9．8％和 133％。运用建立的方法检测20例唐氏综合征患者的血标本和30例正常入的血标本，正常人ACT值范围是 患者永生细胞系建系成功，染色体核型和DNA分析表明建系前后遗传是稳定的。因此，实时荧光定量PCR比 较ACT值的相对定量法快速诊断唐氏综合征是可行的。 关键词：唐氏综合征；荧光定量PCR；相对定量：ACT值；永生细胞系 ofDown’S real—timefluores— multiplex Rapiddiagnosis syndromeby relative cence PCR quantitative GAO Binl，XIAOBail，ZOUQi—Lian2，HUANGShang—Zhi’，WANGLi—Ron93， NIU Mei Zhen Shu—Lan4，YAN1，LEI 1，JIA 1， Xing．Yuan‘，WANGZhan．Yong YUAN Hai．Xinl，WUYanl。LIU Jing．Zhon91 1．BnsicMedicalResearch Medical 100020．China； Center,CapitalUniversityAffiliatedBeijingChaoyangHospital,Beijing ofCell and Medical 350004，China； 2．DepartmentBiologyGenetics，FujianUniversity，Fuzhou Genetics Medical and 3．Medical Sciences，CAMS 100005。China； Laboratory，InstituteofBasic PUMC,Belting 4．Central First Laboratory，PekingUniversityHospital,Beijing100034，China estabfisha