多环芳烃诱导的菌群结构变化研究.pdfVIP

·846· 南方医科大学学报(JSouthMedUniv) 第27卷 多环芳烃诱导的菌群结构变化研究 摘要：环境中的微生物生态变化是理解污染物降解行为的关键。本研究探讨了添加混合的多环芳烃后盐沼底泥中的多 环芳烃降解菌群的动态过程。通过平板培养法和种群特异性变性梯度凝胶电泳分析，发现样品中存在多样化的降解菌。 其中鞘氨醇假单胞菌属和分支杆菌属分别在三环以及四环多环芳烃的降解中发挥重要作用。 关键词：多环芳烃；假单胞菌；分支杆菌；菌群结构；变性梯度凝胶电泳 中图分类号：Q935文献标识码：A 文章编号：1673—4254(2007)06—0846—03 traceelementsmadeof 5 前言 FeS04·7H20， up mg／L； 多环芳烃(PAH)是一大类影响人类健康和生态MnS04·H20，3mg／L；ZnS04·7H20，3mg／L；CoS04· 环境的常见污染物。它们在环境中可以通过物化、生 7H20，1 mg／L，NaCl，2．5 mg／L；(NI-h)酗M07024·7H20，1 物和光化学途径转归．其中生物降解是主要途径。人 g／L。所用盐类均为国产分析纯。 们研究环境微生物的途径主要有两大类：经典的方法 1．2PAH泥浆反应器的设置 是“培养依赖型”，即通过在各种不同的培养基上分离 取100 mLMSM，加入终 g盐沼底泥，添加100 获得纯培养，进而研究纯株的降解行为来阐明生物降 浓度分别为0．01 mg／mL的菲、芘和荧蒽混合溶液。避 解的机制。通过该方法，人们已经分离获得了大量的 光30℃振荡。在第1、4、11、15和21天分别取样，测 PAH降解菌．并发现了降解相关的基因和酶[12I。然 而，研究表明。环境样品中可培养的菌株常常只占总 1．3 PAH测定 菌群的0．1％～10％，即超过90％以上的微生物都不能 取10ml上述样品，冻干后研成粉末。添加10 分离获得纯培养株[3]。因此，近年来，人们新建立了一 些“非培养依赖型”手段一主要为分子生物学技术，如 溶剂，超声萃取两次后，将溶剂部分混合，添加20m1 纯水，分层后取有机部分旋转蒸发，定容至lm1。样 变性梯度凝胶电泳(DGGE)等，直接分析土壤等环境 中总的群落DNA结构，从而更为准确地研究环境微 生物生态学…。研究表明，污染环境中三环以下的低 PAH。 分子PAH相对比较容易降解．而四环及以上的PAH1．4培养法检测菌群结构变化 常常发生积累E51。关于此现象有两种可能的解释：(1) number． 采用最大可能数量法(Mostprobable 环境中仅存在一类降解菌，它们对低分子和高分子 PAIl的降解能力不同。从而导致二者降解速率不同； 鲜样品，10倍梯度稀释后，分别取10 Ixl滴加到添加 (2)环境中存在多种不同的降解菌群，它们分别降解 了菲的营养琼脂培养板上。避光30℃培养1周。观测 高分子和低分子PAH，由于这些菌群之间的丰度和 产生降解圈的菌落数和菌落形态。通过MPN软件计