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多肽N-乙酰氨基半乳糖转移酶2真核表达载体的构建及在SHG-44细胞的表达.pdf

第14 卷第4 期 江 苏 大 学 学 报(医 学 版) VoI. 14 No. 4 2004 年8 月 JournaI of Jiangsu University(medicine ) Aug. 2004 多肽:N- 乙酰氨基半乳糖转移酶2 真核表达载体的构建 及在SHG-44 细胞的表达 1 1 1 1,2 1,2 金美芳 ,潘 浩 ,郭向红 ,仇 灏 ,吴士良 (1. 苏州大学医学院基础医学系生物化学与分子生物学教研室;2 . 生化工程研究所,江苏 苏州215007 ) [摘 要] 目的:为探讨O-糖基化在肿瘤发生发展及转移中的作用和功能,构建pcDNA3/ ppGaINAc-T2 真核表达质 粒并转染人神经胶质瘤细胞SHG-44 。方法:采用PCR 技术从pDONR201-T2 得到ppGaINAc-T2 全长编码序列,亚克隆 至真核表达载体pcDNA-3. 1,脂质体介导基因转染人神经胶质瘤细胞SHG-44 细胞,采用RT-PCR 法检测重组质粒的 表达。结果:酶切图谱分析和基因测序证实pcDNA3. 1-T2 真核表达质粒构建成功。RT-PCR 显示转染细胞有T2 的表 达。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3. 1-T2 ,并成功转染入SHG-44 细胞,为进一步研究ppGaINAcT2 的功能奠 定了基础。 [关键词] 多肽:N- 乙酰氨基半乳糖转移酶2 ;神经胶质瘤细胞;O-糖基化;真核表达载体 R34 [文献标识码] A [文章编号] 167 1 - 7783(2004 )04 - 0277 - 04 [中图分类号] Construction of Polypetide N-acetylgalactosaminyltransferase 2 Eukaryotic Expression Vector and Expression in SHG44 Cells JIN Mei-f ang 1 ,PAN Hao1 ,GUO Xiang-hong 1 ,OI U Hao1,2 ,WU Shi-liang 1,2 (1. Department of Biochemistry and MoIecuIar BioIogy ,MedicaI CoIIege of Suzhou University ;2 . Institute of Biochemistry Engineering ,Suzhou University ,Suzhou Jiangsu 215007 ,China ) [Abstract ] Objective :To construct the eukaryotic expression pIasmid pcDNA3/ ppGaINAc-T2 and trans- fect it into SHG44 ceIIs for expIoring the effect and function of genesis ,deveIopment and metastasis in canc- er. Methods :With PCR the target DNA fragment enco

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