血型检测.doc

5 血型检测 5.1 红细胞血型检测 5.1.1 红细胞血型血清学检测技术规范 5.1.1.1 对标本的一般要求 5.1.1.1.1 实验室所检测标本须有清晰的惟一性标识。 5.1.1.1.2 标本须和血液、血液成分制品来自于同一献血者。 5.1.1.1.3 所检测的标本可为抗凝的或不抗凝的标本。抗凝剂推荐使用乙二胺四乙酸（EDTA）。 5.1.1.1.4 须遵守试剂/仪器使用说明书中所限定的标本制备和保存步骤；当说明书内容不能涵盖相关要求时，可用经确认的标本制备和保存步骤。 5.1.1.1.5 肉眼判定标本是否存在影响检测结果的因素,如溶血、脂血等。 5.1.1.2 仪器设备的要求 5.1.1.2.1 仪器设备在安装后，需校准方可使用，校准周期至少一年一次，仪器设备需有维护程序。所有的校准、维护须有记录。 5.1.1.2.2 仪器设备所使用的软件和实验室的信息系统须经过确认。 5.1.1.3 记录的要求 5.1.1.3.1 所有检测标本具有可追溯性。 5.1.1.3.2 核对当前ABO/RhD定型结果与既往的血型记录是否一致，结果不一致必须查找原因。 5.1.1.4 ABO/RhD定型 5.1.1.4.1 原理 5.1.1.4.1.1 根据红细胞上和血清（或血浆）中有或无A抗原或/和B抗原及其抗体，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。正定型是用已知抗-A或抗-B定型试剂来测定红细胞上有无相应的A抗原或/和B抗原；反定型是用已知A型细胞和B型细胞来测定血清中有无相应的抗-A或/和抗-B。 5.1.1.4.1.2 利用红细胞凝集试验，通过抗-D定型试剂，测定红细胞上是否存在RhD抗原。红细胞上有RhD抗原称RhD阳性，无RhD抗原为RhD阴性。 5.1.1.4.2 试剂与材料 5.1.1.4.2.1 所有用于检测与确认的ABO血型定型试剂都必须符合国家相关规定。 5.1.1.4.2.2 按照试剂使用说明书的要求配制红细胞悬液。如果说明书中无具体要求，建议的红细胞悬液浓度为：试管法、微量板法2-5％，微柱凝胶法0.8-1％。 5.1.1.4.3 技术要求 5.1.1.4.3.1 需用抗-A和抗-B试剂测定红细胞；用A1和B红细胞测定血浆或血清，进行ABO定型。正反定型结果不一致或有疑问，需进一步进行ABO血型确认试验(见5.2.2)。 5.1.1.4.3.2 需用抗-D试剂测定RhD血型；红细胞在直接凝集试验中被IgM抗-D凝集的和在RhD阴性确认试验中被任何一种抗-D凝集的都应标记为Rh阳性。在直接凝集试验和在RhD阴性确认试验中与任何一种抗-D都不凝集的血液需标记为RhD阴性。红细胞与IgM抗-D定型试剂在直接凝集试验中不凝集的标本，需进一步进行Rh阴性确认试验(见5.2.4)。 5.1.1.4.3.3 试管法、微量板法、微柱凝胶法都适用于标本的ABO/RhD定型。 5.1.1.4.4 注意事项 5.1.1.4.4.1 ABO/RhD定型试验需在适应的实验温度中进行。一般实验温度应保持在18-25 ℃。 5.1.1.4.4.2 确认ABO/RhD血型所用的试剂与检测定型的试剂须来自不同的细胞株。 5.1.1.4.4.3 ABO/RhD 血型的鉴定可用经验证有效的基因诊断的方法，通过鉴定相关血型基因来完成ABO/RhD基因定型。 5.1.1.4.5 ABO/RhD定型质控 5.1.1.4.5.1 检测标本时必须阳性和阴性对照试验：对照取决于工作模式使用的方法和试剂的使用说明。试剂 阳性对照 阴性对照 抗-A AB细胞 抗-B BA细胞 抗-D D-阳性D-阴性 A1分型细胞 抗-A 抗-B B分型细胞 抗-B 抗-A ’r或rr细胞不凝集。 5.1.1.5 不规则抗体筛选 5.1.1.5.1 原理 用已知抗原表型的试剂红细胞组，通过直接凝集试验和间接抗球蛋白试验，筛选标本中可能存在的血型同种免疫性抗体。避免含有临床意义的血型同种抗体随血液、血液成分制品一同输入。 5.1.1.5.2 试剂与材料 用于筛选的试剂红细胞必须至少两名无关O型供者，且表达下列抗原：MN，S，s，Mur，Dia，k，Fya，Fyb，Jka，Jkb 和 Lea。并尽可能多的包含Duffy, Kidd血型系统中主要抗原的纯合子以及低频率抗原。不可通过混合来自不同供者的细胞获得需要的抗原表达范围。 5.1.1.5.3 方法 用于标本抗体筛选实验的技术包括：经典的血型血清学盐水悬浮细胞凝集试验、间接抗球蛋白试验以及各种改良的间接抗球蛋白试验；非经典的抗原抗体检测技术包括免疫荧光技术、放射免疫技术、酶联免疫吸附试验（ELISA