利用固定化草酸氧化酶快速检测河豚毒素.pdfVIP

维普资讯 第 12卷第 5期 中 国 水 产 科 学 vO1．12 No．5 2005年 9月 JournalofFisherySciencesofChina September 2005 · 研究简报 · 利用固定化草酸氧化酶快速检测河豚毒素 李德 昆，林 洪，江 洁，曹立民，宫庆礼 (中国海洋大学 水生生物制品安全性实验室 ，山东 青岛 266003) 摘要：本研究旨为快速简便地检测河豚鱼体中河豚毒素(Tetrodotoxin，．rrx)提供可操作手段。将河豚毒素用氢氧化钠 处理，得到定量的草酸盐。利用戊二醛法将草酸氧化酶固定于聚丙烯膜上 ，通过比色法检测草酸含量 ，可以测算出河豚 毒素的含量。结果显示，检测限量为0．80btg·g ，线性范围为 1．44～14．40 ·g_。，加标平均回收率为88．54％，变异系 数在 11％以内。实验证实，该方法可抗河豚体内多种组分的干扰。利用该法测定3组暗纹东方纯 (Takifuguobscurus) 肝脏中河豚毒素含量，并将检测结果与小鼠生物试验进行对照，相关性 良好。该方法检测时间短，对仪器设备要求低 ，便 于推广应用 。 关键词 ：河豚毒素；固定化草酸氧化酶 ；快速检测 中图分类号：$912 文献标识码：A 文章编号：1005—8737一(2005)05—0638 05 河豚鱼 肉质鲜美可 口，但其体 内通常含有河豚毒素 1 材料与方法 (Tetrodotoxin，．rrx)，对人的致死剂量为0．5mg／(70kg)，毒 性比氰化钾强 1000倍 ，是 自然界中毒性最强的非蛋 白类毒 1．1 材料 素…1。中国卫生部从安全角度考虑明文规定严禁加工经营 河豚毒素标准 品 由河北省水产研究所提供，含量 鲜河豚鱼l2j。但这难免造成中国有限的高值海洋鱼类 的浪 99．5％；牛血清 白蛋白(中科院上海生化)；草酸氧化酶 (Ox— 费。日本和韩国等国的实践证明，采用适当的加工方法 ，河 MateOxidase，下简称 OXO，Sigma公司)；辣根过氧化物酶 豚鱼可以安全食用_2。 (HorseradishPeroxidase，下简称 HRP，上海雪满生物公司)；4 合理利用河豚鱼的关键是建立 TTx的检测方法，尤其 一 氨基安替比林 (Simg a公司)；聚丙烯膜 (青岛福林试剂公 是快速检测方法 以判定其毒性。TTX常规的检测方法是小 司)；丁二酸 、苯酚、草酸、戊二醛及其他化学试剂均为分析纯 鼠生物试验 3。该方法快捷，但需要大量的小鼠，且检测结 试剂；暗纹东方豚 (Takifuguobscurus)取 自中国海洋大学太 果为总毒性。高效液相色谱法的研究报道较多 ，但其对样品 平角实验基地；昆明种小鼠取 自青岛药检所 ，雄性 ，体重 (20 预处理条件要求很高，费用昂贵 ，适合做研究_4』。利用免疫 ±0．5)g。 学方法检测 1vrX的发展也很快，该类方法费用低，灵敏度 1．2 方法 高，有望做成试剂盒用于TTx的快速检测。但这类方法需 1．2．1 戊二醛法固定草酸氧化酶 按华惠珍l7]的方法略加 要较长时间来制备抗血清与单克隆抗体_5I6』。此外，还可以 改进。取 50止 丁二酸缓冲液，滴加至聚丙烯膜中心，取 1．5 将 1vrx衍生化后进行检测。本研究通过使用强碱将 ．rrx mg草酸氧化酶与 1．5mg牛血清 白蛋白加入膜上缓冲液，使 处理后 ，得到与TTX成定量关系的 碱与草酸盐。通过检 之完全溶解。振荡滴加 10止 2．5％的戊二醛溶液 ，使之铺 测草酸盐的生成量来定量 TTX。本研究旨在克服前述方法 成直径约8InlTl的圆型薄膜。静置至表面水干，包上渗析 中操作