云芝糖肽在高效液相凝胶柱上色谱行为的研究.pdfVIP

云芝糖肽在高效液相凝胶柱上色谱行为的研究 张志花 杨晓彤* 方积年* 中（国科学院上海药物研究所 上海 200031） 上（海师范大学 上海 200234） 提 要 用高效液相凝胶柱测定了云芝糖肽P（SP）主要组分的分子量，发现分子量随着流动相离子浓度的变化 而变化，离子浓度越小，分子量越大。结果表明，以已知分子量的多糖Dextran作标准测得的云芝糖肽的分子量 只是一个相对值，但在流动相离子浓度一定情况下仍可作为质量控制的一个指标。 关键词 高效液相凝胶渗透色谱法，云芝糖肽，分子量测定 分类号 O658/Q5 44000),T-20(MW21000)。NaCl为国产分析纯试 1 前言 剂，重蒸馏水。 由于多糖的理化性质、生理活性与分子量有很 2.3HPGPC的条件及方法 大关系，所以在多糖产品的质量控制上，分子量是一 流动相为0.002,0.004,0.006,0.008,0.01, 个重要的指标。多糖的分子量的测定方法很多，但这 0.02,0.04,0.06,0.08,0.10,0.20mol/LNaCl 些方法大多繁琐且误差很大 1（）。70年代出现了耐压 均（经G-5玻璃漏斗抽滤并脱气）。三批样品及标准 合成凝胶，使用合成凝胶的高效液相色谱法通常被 品多糖分别溶于上述流动相中，浓度为0.2% 称为高效凝胶渗透色谱法 H（PGPC），用HPGPC测 (W/V)，以16000r/min的转速离心3min，上清液 定多糖的纯度和分子量具有快速、高分辨和重现性 每次进样20μL，流速0.9mL/min,积分仪纸走速为 好的优点，至今，在国内外已得到广泛的应用2（。 1mm/min，温度23℃±2 。样品的色谱图如图1所 云芝糖肽 P（SP）是一种结合蛋白多糖，蛋白含 示。由于不同流动相的色谱图的形状基本相似，均由 量约占15％，已作为药物应用于癌症的防治上4（） 3个峰组成，3个峰的积分面积之比为43.4:28: 因其疗效好、无毒性而普遍受到临床医生的青睐。本 28.6，所以没有列出所有色谱图，但不同流动相时峰 的保留时间不同每（图的3个组分的相对比例基本 文着重研究不同浓度的流动相，用TSK高效凝胶柱 不变）。本文只讨论主要组分的分子量，标准品多糖 测定PSP分子量，并对这一方法引起的误差进行了 的色谱图均为单一峰 （图略）。 探讨。 2 实验部分 2.1 样品 云芝经发酵获得菌丝体，经分离提取获得供临 床应用的样品，共三批。 2.2 仪器和药品 Bio-RadHPLCModel1330泵,ShodexRISE- 51型示差折光检测仪，Waters746DataModule积 分仪。Bio-GelTSK-40和TSK-50两个不锈钢串联 柱 3（000cm×75cm），理论分离范围为MW1000～ 2000000。已知分子量的标准多糖为Pharmacia 出品的DextranT系列：T-500(MW 450000),T-110 (MW 110 000),T-70(MW 68 000),T-40(MW **通讯联系人 本文收稿日期：1996-01-13，修回日期：1996-07-16 为了验证不同流动相浓度对标准曲线的影响， 3 结果和讨论 我们在测定样品时每次用标准多糖DextranT-40 分子筛原理是HPGPC测定多糖或结合蛋白多 作对照，结果发