万氏牛黄清心丸中黄芩甙及小檗碱的高效液相色谱条件优化及分离测定.pdfVIP

万氏牛黄清心丸中黄芩甙及小檗碱的 高效液相色谱条件优化及分离测定 承 新 陈玉英 胡育筑 杨清华 （中国科技大学生物系 合肥 230027 （中国药科大学分析化学教研室 南京 210009） 提要 用高效液相色谱法H（PLC分离测定万氏牛黄清心丸中的黄芩甙和小檗碱组分，建立了色谱优化指标 NCRF，用均匀设计法设计色谱条件进行实验，并对实验结果进行逐步多元回归分析，获得最佳色谱条件为乙腈 ∶水=25 75；籶H2.60，含0.7%三乙胺。色谱柱为SpherisorbC1852504.6mm，结果令人满意。 关键词 高效液相色谱法，小檗碱，黄芩甙，万氏牛黄清心丸，流动相最佳化 1 前言 即可。 随着对中成药研究的深入，高效液相色谱法 3 结果与讨论 H（PLC嚼来越多地用于中成药有效成分的分离分 析。中成药中的组分一般较复杂，使色谱条件的优化 3.1分离条件的确立 变得尤为重要[1]。本文用均匀设计法[2]设计了分离 3.1.1优化指标的设计 万氏牛黄清心丸中有效成分黄芩甙及小檗碱的实 在中成药的研究中，由于组分复杂，各组分的极 验，提出了改进的优化指标NCRF，并用多元逐步回 性相差较大，要求在被测组分之间有足够分离度的 归分析了实验结果，得到了优化的色谱条件，成功地 情况下，能分出尽可能多的峰数，同时峰不对称因子 用于万氏牛黄清心丸中黄芩甙及小璧碱的定量测 也列入优化范围，因此，本文在卢佩章[3]HCRF的基 定。 础上，提出： 2 实验部分 式中，N：色谱峰数目；Ri：被测组分峰分离度；Rid：理 2.1仪器及试剂 想峰对分离度；f：最后峰不对称因子 t：最后峰保留 Waters高效液相色谱仪，510泵，490紫外可变 时间 ：权重因子，=510， 。 波长检测器，U6K进样器，680程序梯度洗脱控制 由该色谱优化指标可以看出，色谱峰数N越 器，色谱柱。 大，则NCRF越高，表示该色谱条件越佳；而相邻峰 盐酸小檗碱，黄芩甙 （中国药品生物制品检定所 对分离度、最后峰不对称因子以及保留时间等条件 提供），万氏牛黄清心丸 市（售，天津达仁堂制药厂）， 则互相约束，在N相同的情况下，这三方面只有综 乙腈色（谱纯），其它试剂均为分析纯。 合作用达到最佳时才能获得最好的分离效果。因此， 2.2 样品处理 NCRF能较全面地反映对色谱分离的要求。 取市售万氏牛黄清心丸两丸，剪碎。称取约相当 3.1.2 色谱条件的优化 于一丸的量，加一倍量的硅藻土，研磨均匀，精确称 通过初始实验，选定乙腈浓度、pH值、三乙胺添 定，放入滤纸筒中，置于索氏提取器内。用50mL甲 加量为三因素，根据均匀设计表U77 见表 1设 醇连续回流8h，冷却，浓缩，定容到50m