一种简易的昆虫基因组DNA提取方法.pdfVIP

维普资讯 第 27卷 第 4期 陕西师范大学学报 (自然科学版) Vo1．27 No．4 1999年 12月 JournalofShaanxiNormalUniversity(NaturalScienceEdltmn) Dec．1999 (妄) 一 种 摘 要 ：报道 了一种改进的昆虫基因组DNA 的提取方法．结果表明，该方法可在常 温务件下，对多种昆虫及人体组织进行酚 ／氯仿抽提 ，DNA得率较高，OD260／280的 ^值在1-6～1·9亭间· 关键词：基因~}DNA；提取；昆虫 中图分类号：Q鸵3 文献标识码 ：A 文章编号：1001—3857(1999)04—0082-03 昆 腕 在分子生物学研究 中，基因组 DNA 的应用十分广泛，提取方法在 国内外亦有不少报道． 概括起来可分为两太类 ：(1)盐析提取法；(2)有机溶剂提取法．本文介绍的提取方法即属于后 螅郭组 船觚 者，该方法参照Marchant(1988)蝗虫基因组DNA 的提取方法，并综合其他提取方法的优点而 建立． 1材料与方法 1．1 材料 A 蝴 本文以蟋蚌、螽糟亍、蝗虫、天牛、蜻蜓以及人的血液、肝脏、胃癌组织等作为实验材料，人的 血液、肝脏、胃癌组织为一80C冻存材料，昆虫标本则包括新鲜标本、一30C冻存标本、酒精浸 泡标本及干标本等、 ． 1．2 试剂及溶液 1．2．1 匀浆缓冲液 由8份A液，1份 B液及 1份C液组成 (用时新鲜配制)． 法 A液 ：Tris0．05otol／L；NaC10．1mol／L；EcrrA0．1mol／L；pH 7．0～8．0． B液 ：5 的SDS． C液：2mg／mL的蛋 白酶K． 1．2．2 平衡酚 pH6．7～7．8．另外，氯仿 ：异戊醇 (24：1)；无水乙醇及 70 乙醇． 1．3 操作步骤 1．3．1 研磨 取少量动物组织迅速剪碎于装有 0．6mL匀浆液的1．5niL离心管中，用特制 的与离心管相匹配的小杵研磨． 1．3．2 水浴 37℃水浴 1～3h，直至混合液消化得很清亮为止． 1．3．3 酚抽提 在混合液中加入等体积的平衡酚，上下缓慢颠倒十次，切勿剧烈振荡，在台式 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目(3957010) 收稿 日期：1998—12—05 作者简介 田英芳，女，26岁，硕士 维普资讯 第4期 田英芳 等 ：一种简易的昆虫基因组DNA提取方法 83 高速离心机上 6000r／nfin离心 10nfin，取上清液． 1．3．4 重复步骤 3 直至水相与酚相的界面处看不到白色的蛋 白质层为止，取上清液． 1．3．5 氧仿 ：异戊醇(24：1)抽提 在上清液中加入等体积的氯仿 ：异戊醇，上下缓慢颠倒 十次，在台式高速离心机上 8000r／mln离心 i0min，取上清液． 1．3．6 沉淀DNA 在上清液中加入 2倍体积 的冷无水 乙醇 (预先置一20E冰箱内)沉淀 DNA．冰箱 内放置 10min，12000r／nfin离心 10min，弃上清液． L3．7 洗涤DNA 在留有沉淀的离心管中加入 1mLT0 的冷乙醇洗涤DNA，在台式高速 离心机上 10000r／min离心 5min，倾去上清液． 1．3．8 保存 自然干燥 ，冰箱内4℃长期保存，使用时加入超纯水或TE溶解． 1．4 DNA样品的检测 0．8 的琼脂糖凝胶 电泳检测．紫外分光光度计检测． 2 结果与讨论 图1为按照本方法提取的各类标本的基因 组 DNA 电泳 图谱 ．基因组 DNA 电泳谱带整 齐 ，紧随带后无拖尾，说明提取的DNA大分子 较为完整．同时，紫外分光光度计的检测结果表 明，DNA样品的OD260／280值普遍在 1．6～ 1．9之间，说 明提取 的DNA较为纯净，如用 RNase处理样品，可基本消除RNA的干扰，使 OD26O／280的值趋于 1．6～1．8之间． 同其他的提取方法相 比较，本方法具有 以 下