【讨论】HPLC理论塔板数对含量测定及有关物质测定的影响[精华].docVIP

翻看药典时发现大多品种在“HPLC含量测定项下”都有类似“以。。。峰计，理论塔板数不得你于。。。”的说法，可各品种塔板数规定的差别很大，低的有七八百,高的有四五千,还有的没有规定塔板数!?请教各位:1. 塔板数在含量测定项下规定， 是不是代表塔板数高低会影响含量测定准确性？2. 本人认为塔板数是柱效的一种体现，塔板数过低会影响杂质的分离度，因此其影响的应该主要是“有关物质”测定，而不是含量测定！不知这种理解是否正确？3. 塔板数若比国家标准规定的低，在审评的时候是不是一定会有问题呀？先想到这些，请各位战友说下自已的“塔板数”在实际工作中的理解！ quote]ydxzluck wrote: 2. 本人认为塔板数是柱效的一种体现，塔板数过低会影响杂质的分离度，因此其影响的应该主要是“有关物质”测定，而不是含量测定！不知这种理解是否正确？ 同意上面说法，柱效就是体现柱子对某物质的分离情况！ quote]ydxzluck wrote: 3. 塔板数若比国家标准规定的低，在审评的时候是不是一定会有问题呀？ 先想到这些，请各位战友说下自已的“塔板数”在实际工作中的理解！ 我觉得只要分离度、拖尾、对称性等符合要求，而塔板数比国家标准规定的低，在审评的时候应该不会有问题！ 以上只是个人看法，不对之处，请大家指出、讨论共同学习！ 这个是个很有意思的话题，牵涉到到底应不应该把柱效这个数据放入质量标准中，到底有什么依据呢？这个柱效是怎么计算出来的？比较理想的就是以半峰宽计算，当然也有用峰宽计算出来的。柱效高，那么峰宽相应的要窄一点，并且自然分离度要提高那么峰面积是如何计算出来的呢？套用N2000工作站说明书一句话，“N2000色谱工作站积分时，先是辨别每一个峰的开始及结束时间，并用“|“符号标记这些点，同时寻找这些峰的顶点，确定保留时间，建立基线，计算峰面积、峰高及峰宽。这些过程由积分参数表、时间表、手动积分事件表控制。”那么好了，柱效如果低，那么色谱流出曲线自然不是正态发布，如何确认起点和终点自然精密度不高因此，结论是柱效的数据对色谱峰的峰面积肯定有很大影响，应该修订进去有关物质同理，分离度的高低只能说明两个峰是否达到基线分离，至于主成分和杂质峰的定量计算还是要依据柱效这个重要参数来控制想到过去，还要靠手算来计算峰面积，柱效更加重要了，可以参考成都师范高等专科学校姚老师的一篇文献“气相色谱法的柱效参数和峰面积计算的讨论” 如果峰形对称并符合正态分布，N可近似表示为： N＝16(TR/W)2＝5.54(TR/Wh/2)2 N为常量时，W随tR成正比例变化。在一张多组分色谱图上，如果各组份含量相当，则后洗脱的峰比前面的峰要逐渐加宽，峰高则逐渐降低。 用半峰宽计算理论塔板数比用峰宽计算更为方便和常用，因为半峰宽更容易准确测定，尤其是对稍有拖尾的峰。 N与柱长成正比，柱越长，N越大。用N表示柱效时应注明柱长，如果未注明，则表示柱长为1米时的理论塔板数。（一般HPLC柱的N在1000以上。）若用调整保留时间（tR’）计算理论塔板数，所得值称为有效理论塔板数（N有效或Neff）=16(tR’/W)2 影响因素N取决于固定相的种类、性质（粒度、粒径分布等）、填充状况、柱长、流动相的种类和流速及测定柱效所用物质的性质。 我做中药质量分析时，理论塔板数常常是考察指标之一。要求:仿制或改剂不能低于标准的理论塔板数。自拟标准理论塔板数也不能定的太低。 不要过于担心：好柱子、好的试验方法及规范的操作，走出的图谱自然符合要求。塔板数不可能低！ 响应版主号召，大家继续讨论，我继续总结总结：1.??理论塔踏板数：塔板数是柱效的一种体现，塔板数过低会影响杂质的分离度，严格地讲塔板数越高含量越准确，但是影响是很小的！主要是因为柱效越高可以提高分离度，有时用柱效低的柱子，有可能把两个性质相近的峰分不开，在色谱图中看着只是一个峰，但实际是两个峰重到一块！柱效高低对峰面积影响较小，主要是在积分时引起误差，柱效高的相对来说误差较小。实际工作中理论塔板数在其中不是占主要的地位，其实写资料的时候也是写的不是太高的，但是比现行的药典上的方法要高一点就可以，当然理论塔板数越高越好，前提是要分离的好。2.??理论塔板的意义：理论塔板数是反映色谱的柱效参数之一,用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。中国药典2005版2部，通则色谱法项下HPLC法要求了四个参数，包括理论塔板数，分离度，拖尾因子，和精密性。其中特别要求精密性和分离度。理论塔板数和拖尾因子给分离度和精确性提供了必要的信息。对于一个validated HPLC method来说，为了确认方法在使用时达到方法要求的良好的精密性，准确度和专属性等，要求使用者在应用该法时必须达到其系统适用性。所以，如果理论塔板