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ERα基因多态性与Alzheimer病智能衰退的相关分析 　　作者：周伯荣 张惠敏 孙筱放 许治强 邓燕华 作者单位：广州医学院第三附属医院神经内科，广东 广州 510150 　　【摘要】目的 探讨中国汉族人群中雌激素受体(ER)Α基因酶切多态性与散发性Alzheimer氏病(SAD)的发病及其智能衰退的相关性。方法 采用聚合酶链反应限制片段长度多态性方法，检测63例AD患者及70例健康对照老年人的ERΑPvuⅡ、XbaⅠ酶切基因多态性;采用MMSE、ADL量表观察38例AD患者6个月的智能衰退状况与ERΑ基因多态性的关系。结果 AD组ERΑ等位基因x的频率、Pp、xx、Ppxx型较对照组明显增加，而PP、XX、PPXX型明显减少(P0.05);XbaI酶切基因多态性xx、Ppxx与AD发病明显正相关(OR分别为2.34,95%CI 1.47～4.09和 1.79,95%CI 1.26～3.12)(P0.05)。Pp与AD发病无明显相关(OR 1.58，95%CI 1.15～2.12)。ERа基因xx、Ppxx型与AD的智能衰退无明显相关性。结论 雌激素Α受体xx或Ppxx基因型是SAD发病的危险因素，但与AD的智能衰退无明显相关性;ERΑXbaⅠ基因酶切多态性xx型可能与中国汉族SAD的发病具有相关性。 　　【关键词】 雌激素受体Α 基因多态性 Alzheimer氏病 智能衰退 　　研究发现，雌激素受体а的基因多态性与散发性AD(sporadic Alzheimer′s disease，SAD)的发病存在密切相关性〔1～4〕。但是，各地的研究结果存在明显不一致性，Brandi等〔2〕发现SAD患者ERа基因的X或P基因型较对照组明显增高，而最近的研究显示ERа基因的xx型与意大利人的AD发病相关〔3，4〕。但在中国人群中ERΑ的基因多态性与SAD的发病是否存在密切相关性，ERΑ基因多态性与AD的智能衰退是否相关，目前此类研究报道较少。本研究拟观察ERΑ基因多态性与AD发病及其智能衰退的相关性。 　　1 材料与方法 　　1.1 对象 根据DSMⅣ的诊断标准，依据临床病史、症状、应用简易精神智力测定量表(MMSE)、日常生活功能评定量表(ADL)、汉密顿抑郁量表和Hachinski缺血量表筛选评定，并行神经系统体检和头颅MR或螺旋CT检查排除其他类型的痴呆，要求MMSE评分≥9分或≤20分，无亲缘关系，无明显消化系统疾病、冠心病、肝肾疾病者，获得临床诊断为可能性SAD患者63例，男24例，女39例，年龄58～70岁，平均(71.25±9.17)岁，MMSE评分90～20，平均13.25±5.74，ADL评分38～62，平均(45.70±10.05)，其中有轻度高血压病10例、糖尿病9例、高脂血症6例。对照组70例，均为体检中心全面检查合格的健康老年人，按痴呆组的年龄和性别比例分层随机抽样入组，男26例，女44例，平均年龄(70.58±8.20)岁，其中有轻度高脂血症患者18例。两组之间的平均年龄、性别比无明显统计学上的差异。共入组AD患者38例，男12例，女25例。采用MMSE、ADL分别于入组初期、入组后第3、6个月评定AD患者的智能状况。期间患者不使用胆碱脂酶抑制剂或其他脑神经营养剂。 　　1.2 方法 　　1.2.1 引物设计与合成(上海生工生物有限公司合成) 雌激素受体序列：P1：5′CTGCCACCCTATCTGTATCTTTTCCTATTCTCC3′，P2：5′TCTTTCTCTGCCACCCTGGCGTC GATTATCTGA3′。 DNA分子量标准(Mark，深圳益生堂生物企业有限公司提供)：分子量由大到小顺序为2 000、1 600、1 200、800、600、400、200 bp。 　　1.2.2 雌激素受体基因型分析 全血基因组DNA提取采用快速提取法。聚合酶链反应(PCR)：雌激素受体反应体系共50 Μl，无菌去离子水34.3 Μl，10×PCR缓冲液5 Μl，200 Μmol/L dNTP 4 Μl，引物为40 pmol,模板DNA 100 ng,TaqDNA聚合酶1 U。反应条件:预变性94℃ 3 min,94℃ 30 s，61℃ 40 s，72℃ 90 s，共35个循环，最后延伸72℃ 5 min，扩增产物大小为 1.3 kb。限制性内切酶酶切反应分别用PvuⅡ酶6 U、XbaⅠ10 U酶对雌激素受体PCR产物进行酶切反应,经1.2%琼脂糖溴乙锭凝胶电泳40 min,凝胶成像仪下判断结果并摄像。 　　1.3 统计学分析 采用SPSS10.0统计软件对计数资料采用Χ2检验，计量资料用x±s表示，采用Logiest多元回