超抗原融合基因VEGF—SEA克隆、原核表达及蛋白纯化.pdfVIP

维普资讯 生物技术通报 ． 研 究 报 告 ． BIoTECHNoLoGY BULLETIN 2008年第 2期 超抗原融合基因VEGF．SEA的克隆、原核表达及蛋白纯化 朱宏丽 孙嘉琳 罗金凤 (天津科技大学生物T程学院，天津 300457) 摘 要： 根据Genebank报道的VEGF(NM一003376)、SEA(A28664)基因序列，对密码子进行优化，合成血管内皮细 胞生长因子和超抗原基 因序列，将VEGF—SEA基 因片段插入质粒pET22b构建重组质粒pET22b—VEGF—SEA。重组质粒经 序列分析正确，转化大肠杆菌BL21(DE3)进行 IPTG诱导表达，表达产物经SDS—PAGE分析蛋 白奈带与预期一致，证明 融合蛋白原核表达成功。产物经His-BindBufferkit试剂盒纯化，纯度达到9()％，这一成果为进一步研究VEGF—SEA融合 蛋白的活性及其功能，探讨超抗原抑制肿瘤生长作用奠定了基础。 关键词： 超抗原 融合蛋白 原核表达 复性 Cloning，ProkaryoticExpression and Purification of VEGF．SEA Genes ZhuHongli SunJiMin LuoJinfeng (CollegeofBiotechnologyEegineering，Ti哪 inUniversityofScienceandTechnology，Ti删 in300457) Abstract： AccordingtotheVEGF (NM一003376)and SEA (A28664)genesequencesrfom Genebank，theircodons were optimized，and VEGF-SEA fusion gene segmentwassynthesized．Then the VEGF—SEA fragmeiltwasinserted into the plasmid pET22b and pET22b—VEGF-SEA WaS constructed．Itwasverified by the nucleotide sequence thatthe eukaryotic vectorwascorrect，and the fusion protein wasexpressed eflficiently in E．coli1BL21 (DE3)，which was consistent as expected by SDSanalysis．The productswere purified by His。Bind Buffer kit，and the purity of targetproteinsWaSmore than 90％．Thisstudy establishesa basisforfurtherstudy ofVEGF—SEA ufsion proteins’natural activiyt andufnction in killing tumours． Keywords： Supperantigen Fusionprotein Prokaryoticexpression Renaturation 治疗恶性肿瘤 ，除手术治疗外 ，传统的放射治疗 、化学治疗等均系直接杀伤肿瘤细胞 ，杀伤作用虽强 。 但选择性很弱 ，故在杀伤肿瘤细胞 的同时也大量杀伤正常细胞 。另一方面 ，机体的免疫能力不足是肿瘤发 生 、发展的主要原因之一。通过提高机体的免疫力 ，特别是细胞免疫能力以达到治疗肿瘤 的目的．是 目前肿 瘤生物治疗研究的重要方向。因此 ，在临床实践中需要能对肿瘤细胞进行特异性杀伤的治疗方法 ．而可选 择性地与