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应用绿色荧光蛋白标记技术研究钙调激_在HeLa细胞中的分布.pdf
25 2 ( ) Vol.25 No.2
2002 JOURNAL OF NANJING NORMAL UNIVERSITY(Natural Science) 2002
应用绿色荧光蛋白标记技术
研究钙调激 在HeLa 细胞中的分布
吴耀春, 戴谷, 胡艳, 李朝军
( , 210097, )
[ ] ( GFP) ( CaMK ) HeLa
. , CaMK GFP ,
pCaMK - GFP HeLa . , , CaMK - GFP
, , .
,GFP .
[ ] , ,
[ ] Q812, [] A, [ ]2002)
0 引言
2
( Ca / CaM- dependent protein kinase ,
2
) Ca / CaM ,
! tau , . [ 1~ 3] ,
2
( Ca ) G1/ SG2/M
2
. Ca ( CaM) .
[4]
, CaM S G2
, ,
. , G2
. CaMK , G2/ M
, .
CaMK ( GFP) , HeLa ,
CaMK - GFP GFP ,
, ,
, .
1 材料与试剂
:
: .
: , 1977 , , .
: , 1966 , , , .
12
, : HeLa
11
DH5HeLa ( ) , pTGEMTeasy (
Promega ) , pEGFPN1( CLONTECH ) .
12
pfu DNA ( NEB ) ; T4 DNA Bgl Sal !Sac
Kpn!( TaKaRa ) . AMERSCO .
13
( CaMK ) cDNA Hiroaki Kanki.
; PCR (PTC- 225,PE ) ;
2 验方法
21
pEGFP- N1 , 5∀
GAAGATCTATGGCTGTAACCTGC3∀ ; 5∀TTGTCGACTGGAGGGGTGCAACGGG3∀ .
Bgl , Sal !.
.
22 PCR
CaMK ( CaMK )
cDNA , PCR 1. 6kb
CaMK .
pTGEM- Teasy , pEGFP- N1
Bgl Sal !,
pCaMK - GFP . PCR ,
CaMK cDNA .
,
. 1 pCaMK - GFP
23
HeLa DMEM , 10%100IU
. 37 # 5%CO . pEGFP- N1 ,
2
[5]
HeLa .
24
HeLa CaMK - GFP ,
, . ( Leica DM IL)
CaMK - GFP . , PIC SHUTTLE
, EZTouch Ver. 3. 3. 02.
13
() 25 2 (2002 )
3 结果
31 PCR
PCR 0. 8% , 1. 6kb
, cDNA ( 2) .
2 PCR 1, 5: Marke
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