经右侧颈总动脉插管脑灌注对深低温停循环兔脑组织超微结构与自由基的影响.docVIP

经右侧颈总动脉插管脑灌注对深低温停循环兔脑组织超微结构与自由基的影响 　　作者：韩家付　　作者单位：江苏大学附属人民医院 心胸外科，江苏 镇江 212000 　　【摘要】 目的 观察深低温停循环(DHCA)时经右侧颈总动脉插管脑灌注对兔脑组织超微结构与自由基的影响。方法 健康大耳白兔16只,随机分为2组,每组8只。实验组给予DHCA 60min +经右侧颈总动脉插管脑灌注处理;对照组仅作DHCA 60 min处理。两组分别于停循环后60min恢复循环，至鼻咽温度和肛温均30℃时维持30min,停机，处死动物，取少量脑组织检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)含量并进行比较，同时取脑皮质通过透射电镜观察脑组织超微结构的改变。结果 实验组脑组织MDA含量明显低于对照组(P0.01)，SOD活性明显高于对照组(P0.01)。电镜结果显示，实验组各种神经元细胞器损伤较对照组明显减轻。结论 DHCA期间应用右侧颈总动脉插管脑灌注符合生理情况，可维持DHCA时脑血流的供应，清除自由基，减轻脑损伤。 　　【关键词】 深低温停循环 丙二醛 超氧化物歧化酶 脑灌注 兔 　　深低温停循环(DHCA)技术广泛应用于复杂先天性心脏病、主动脉弓及胸主动脉手术中，但是,中枢神经系统对缺血的耐受力低限制了停循环的安全时限,停循环超过45～60min后神经系统并发症发生率显著上升[1]。由于深低温条件下脑代谢活动并非完全停止，使脑缺血缺氧逐渐加重;而DHCA后的再灌注又会加重脑组织的病变，形成脑缺血再灌注损伤。目前对DHCA导致的脑损伤机制仍不十分清楚。近年来,临床上采用选择性顺行性脑灌注在DHCA中进行脑保护,取得较好效果[23]。我们利用兔DHCA模型,观察经右侧颈总动脉插管灌注对DHCA兔脑组织的超微结构和自由基的影响,探讨其可能的脑保护机制,为该技术在临床应用提供实验依据。 　　1 资料与方法 　　1.1 实验动物及分组 　　成年健康大耳白兔16只,雌雄不拘,体重2.2～2.9kg(江苏大学动物养殖中心提供)。动物饲养与实验要求均符合我国卫生部《医学实验动物管理实施细则》(1998)的规定。将动物随机分为2组,每组8只。实验组给予DHCA 60 min +经右侧颈总动脉插管脑灌注处理;对照组仅作DHCA 60 min处理。 　　1.2 主要仪器与试剂 　　Stockert双头滚压泵，BP200婴儿呼吸机，多导生理监护仪，动物实验膜肺(西安西京医疗用品有限公司提供)，超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA)检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)。 　　1.3 体外循环准备 　　预充新鲜兔全血50ml,血定安20 ～ 30ml,5%碳酸氢钠5ml,10% MgSO4 0.3mlokg-1,甲基氢化泼尼松15mgokg-1,总预充量为75～85ml。16G套管针主动脉插管,右心房插管内径4mm,右心房重力引流落差40～60cm。 　　1.4 体外循环动物模型的建立 　　动物术前12h禁食,不禁水。清醒状态下称重,建立耳缘静脉通路。25%乌拉坦静脉麻醉，麻醉后气管切开，插管,接呼吸机,维持PO2在100～300mmHg(1mmHg=0.133kPa),PCO2在35～45mmHg。右股动脉插管检测平均动脉压(MAP)。耳静脉注入肝素400Uokg-1,术中根据活化凝血时间(ACT)适当补充。胸骨正中切口暴露心脏,对照组升主动脉插灌注管,实验组分离右侧颈总动脉行动脉插管。两组均经右心耳插房管,建立体外循环(CPB)，并行降温使鼻咽温度降至30℃,心包腔置冰屑局部降温,继续降温至鼻咽温度为18℃时停循环。实验组停循环后阻断无名动脉、左锁骨下动脉和左颈总动脉,经右侧颈总动脉插管脑灌注,流量为10mlomin-1okg-1;两组动物均停循环60min之后恢复循环,同时加入10% MgSO4 0.3mlokg-1、甲基氢化泼尼松15mgokg-1、甘露醇1.5g、速尿2mg,10min后缓慢复温,复温时间超过1h，直至鼻咽温和肛温均36℃时维持30min,停机。处死动物，在最短时间内完整取出兔脑,切取左侧脑组织,放入液氮中保存,统一测定。 　　1.5 脑组织SOD活性及MDA含量测定 　　取出的大脑皮层组织称重,冰浴中匀浆,4℃下2 000romin-1离心10min,取上清液,采用黄嘌呤氧化酶法检测脑组织SOD活性,硫代巴比妥酸法测定脑组织MDA含量。 　　1.6 透射电镜观察 　　取大脑皮层组织约1mm3,放入4%戊二醛前固定,1%锇酸后固定,乙醇梯度脱水,环氧树脂包埋,制成超微薄片,醋酸钠柠檬酸铅双重染色,于透射电镜下