复方姜黄合剂对糖尿病大鼠视网膜新生血管形成干预.pdfVIP

复方姜黄合剂对糖尿病大鼠视网膜新生血管形成的干预 1* 2 1 1 陈奇 ，陈雪梅，刘秋琼，陈松海 （1. 广东医学科学院/广东省人民医院药学部，广州市 510080；2. 中山大学附属第一医 院眼科，广州510080） 摘要 目的：探讨复方姜黄合剂对糖尿病大鼠视网膜新生血管的干预效果，并研究其剂量 一疗效的关系。方法：STZ 链脲佐菌素 诱导糖尿病大鼠成功后，实验鼠随机分为合剂低剂 量组、合剂中剂量组、合剂高剂量组、模型组、羟苯磺酸钙组，并设正常对照组。合剂组和 羟苯磺酸钙组分别用复方姜黄合剂和羟苯磺酸钙，模型组和对照组用等容量蒸馏水灌胃。20 周后，将实验大鼠处死。取眼球行视网膜消化铺片，观察血管形态，微血管数目，计算每高 倍镜视野直径长度的血管数目。结果：复方姜黄合剂有降低糖尿病大鼠视网膜微血管密度的 作用，合剂各剂量组与模型组比较，有显著差异 P 0．05 。结论：复方姜黄合剂对糖尿病 大鼠视网膜新生血管形成有抑制作用。 关键词 复方姜黄合剂 糖尿病大鼠视网膜 新生血管 微血管密度 糖尿病性视网膜病变 diabetic retinopathy，DR 是糖尿病 diabetes mellitus，DM [1] 最为常见和严重的微血管并发症之一，也是成人盲的四大致盲性眼病之一 。一旦发展成增 殖型糖尿病视网膜病变 proliferate diabetic retinopathy，PDR ，往往对视功能造成不 可逆的损害，增殖的血管易破裂而致视网膜前和玻璃体出血、视网膜脱离，导致失明，全球 [2] 每年有3万～4万人因PDR失明 。视网膜新生血管的形成是PDR的主要标志，也是影响预后的 关键。复方姜黄合剂主要由姜黄、丹参、生地、葛根、枸杞子等药组成，有活血通络，生津 止渴，养肝明目功效。临床使用观察，对视网膜新生血管形成抑制效果显著。本研究在建立 糖尿病视网膜病变大鼠模型的基础上，使用不同剂量的复方姜黄合剂，探讨其对实验性糖尿 病大鼠视网膜新生血管是否有抑制作用和量效关系，为复方姜黄合剂防治视网膜病变提供确 切的实验依据。 1 材料与动物 1．1 药品 姜黄15g 丹参20g 三七10g 葛根20g 生地20g 枸杞10g（广州市药材公司提供） 制备方法：称取丹参20g、 三七10g 、葛根20g，至圆底烧瓶中，加入8倍量95%乙醇，回 流提取1.5h，滤过，残渣以上述条件重复提取两次，滤过，合并滤液，减压回收乙醇至无 醇味，得浓缩液A。残渣低温保存于冰箱中。取姜黄药材饮片，粉碎，过四号筛，称取15g， 加入10倍量蒸馏水，加入沸石2颗，至挥发油提取器中，提取6h（保持微沸），收集挥发 油B，水提液C另用容器保存。残渣低温保存于冰箱中。取前述姜黄、丹参、三七、葛根残 渣，加枸杞10g、生地20g，加入12倍量蒸馏水，回流提取1.5h，滤过，残渣以上述条件 重复提取两次，滤过，合并滤液，浓缩至适量，用95%乙醇调节含醇量至55%（缓缓加入， 且边加边搅拌），得醇液D，低温静置24h。取前述所制得的醇液D，滤过，滤液回收乙醇至 无醇味，水浴锅上（55℃~65℃）浓缩至相对密度为1.26~1.30，加入浓缩液A、挥发油B、 水提液C、苯甲酸钠3g和矫味剂适量，加蒸馏水至1000ml，即得复方姜黄合剂。置于冰箱 中低温保存（4℃）。 1．2 动物 SPF级雄性Wistar大鼠60只，体重160—220g，（中医药科大学动物中心提供）检查屈光，间 质清，瞳孔等大等圆，对光反应好。分笼饲养在清洁级动物房内，全价颗粒饲料喂饲，不限 食水，自然昼夜光线照明。室内通风良好，氨浓度小于2QPPM，室温保持18-220C，相对湿度 1 为40％一70％。 1．3 试药与试剂 链脲佐菌素 Streptozotocin，STZ Sigma公司，美国。胰蛋白酶：上海生工。磷酸二氢钠： 汕头化学试剂厂。磷酸氢二钠：汕头化学试剂厂。氯化钠：广州化学试剂厂。氢氧化钠：广 州化学试剂厂。多聚甲醛：广州化学试剂厂。TRIS碱：上海生工。浓盐酸：广州化学试剂厂。 氢氧化钠：广州化学试剂厂。柠檬酸：天津大茂化学试剂厂。柠檬酸钠：天津大茂化学试剂 厂。无水乙醇：汕头化学试剂厂。二甲苯：汕头化学试剂厂。香柏油：上海标本模型厂。水 合氯醛：自配。血糖试纸：ROCH，德国。尿糖试纸：广州白云山制药总厂。染色所用溶液： 中山大学中山眼科中心病理室提供。 1．4 试剂配制 磷酸缓冲液 0．01M，PH：7．2PBS 的配制：30．8gNaHP0—12H0，0．28gNaHP0—12H02 4 2 2 4 2 和8．5g NaCl，溶于800ml双蒸水中，待完全溶解后用双蒸水定容至