表达绿色荧光蛋白重组传染性支气管炎病毒拯救其生物学特性与研究.pdfVIP

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2015-08-15 发布于安徽
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表达绿色荧光蛋白重组传染性支气管炎病毒拯救其生物学特性与研究.pdf

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619 家禽生产与禽病防治专题 0 T040098 表达绿色荧光蛋白重组传染性支气管炎病毒的拯救及其生物学特性研究周生唐梦君1’2戴亚斌1赵宝华1程旭1沈欣悦1 (1．中国农业科学院家禽研究所，江苏扬州225003；2．农业部家禽品质监督检验测试中心，江苏扬州225003) 引言 Bronchitis 传染性支气管炎病毒(InfectiousVirus，IBV)属于冠状病毒科冠状病毒属，其基因组为不分节段的单股正链RNA，全长约为27．6kb，具有典型的5 7帽子和3’PolyA尾巴结构，至少有10个明显 7 的开放阅读框(ORF)，分别编码病毒的结构蛋白和非结构蛋白。现已确定的ORF的定位次序是5 1a．1b．S．3a．3b．E．M．5a-5b—N．37。3ab、5ab均为病毒编码的非结构蛋白，在IBV感染细胞内均可检测到，但其功能目前尚不清楚。已有研究表明3ab、5ab编码区的缺失并不影响IBV病毒的复制和致病性。课题组前期建立了IBVH120疫苗株的反向遗传操作系统，在此基础上，采用增强型绿色荧光蛋白(EGFP) 定H120．5a／EGFP的生物学特性，探讨IBV作为载体表达异源蛋白的可行性。材料方法结果膜、羊膜等组织中能检测到绿色荧光；拯救病毒能引起IBV感染鸡胚后的特征性变化；经I型卵磷脂酶C 能检测到病毒，但在绒毛尿囊膜等组织中观察不到绿色荧光，进一步测序结果表明插入H120基因组中的EGFP基因发生缺失。讨论本研究通过反向遗传操作技术成功拯救获得了表达绿色荧光蛋白的传染性支气管炎重组病毒引起感染鸡胚特征性的变化，因此5a基因的缺失并不影响病毒对鸡胚的致病性。已有研究表明，部分外源基因插入冠状病毒基因组后，重组病毒在传代过程中是不稳定的。本研究也发现H120—5a／EGFP在连续传代过程中目的基因发生了缺失，因此开发以冠状病毒为载体的外源基因表达系统需要解决外源基因的稳定性问题。参考文献(略)