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467 养猪生产与猪病防治专题 o T030107 L-1 PRRSV变异株ORF6基因与I8共表达真核质粒的构建及其表达木 王晓莉“李志杰丁壮”+张泉鹏 30062) (吉林大学畜牧兽医学院，吉林长春1 目的 pEGFP．ILl8一ORF6作为核酸疫苗的免疫效果，分析IL．18作为分子佐剂的免疫增强作用。 材料方法 的引物，上游引物ILl8F(含有Xho I酶切位点和一段柔性氨基酸序列(Gly4Ser3)3)： GCACTCGAGATGTACTTGGClA，下游引物ILl8R(含有HindIII酶切位点 PRRSV JI_／07／SW的ORF6基因的核苷酸序列，设计一对特异性引物，上游引物0RF砸(含有HjndIIl酶切位点)： AAGCn’ATGGGGTCGTCTCTA， 下游引物ORF6R：(含有BamHI酶切位点)： 片段与pMD一18T载体连接，经克隆与序列测定，将正确的重组质粒双酶切，将两个目的基因克隆于真 Western—blot鉴定构建的真核表达质粒pEGFP—ILl8一ORF6的正确性。 结果 表明表达产物具有特异免疫学反应。 讨论 本试验选用了PRRSV 核苷酸同源性能达到94．3％～99．1％，同时连接具有较强免疫调节能力的IL-18，构建了真核表达质粒 无种属特异性，对细胞生长和功能无明显影响，耐光漂白。试验中可转染后的细胞直接置于荧光显微镜 下观察，可见细胞质中有绿色荧光蛋白的表达，表明连接有IL．18基因和ORF6基因并不影响PEGF的表 达，同时能够能快速准确的检测转染效果及效率。本试验正确构建真核表达质粒pEGFP—ILl8一ORF6，经 免疫印迹验证阳性质粒能够在真核细胞中真确表达目的蛋白，为研究重组真核质粒pEGFP—ILl8．ORF6 作为核酸疫苗的免疫效果，分析IL．18作为分子佐剂的免疫增强作用奠定了基础。 ·基金项目：广东省科技关攻重人项目(2008A020100020)。 ··作者简介：王晓莉，女，硕士研究生，手要从事分子病毒学及动物传染病防控研究． ·+·通讯作者：丁壮，E-mail：Ding_．zhuang@yahoo．COIII．cn。
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