高密度发酵制备重组人可溶性TRAIL.pdfVIP

维普资讯 · l32 · 。 e ；23(2) · 论 著 · 高密度发酵制备重组人可溶性TRAIL 王梁华。朱玉平 ，娄永华 ．周劲松!，彭王珍。球 谊 焦炳华 (1-第二军医大学基础医学部生物化 学与分子生物学教研室 ，上海 200433；2．上海恰 尔生物技术有限公司) ：摘要] 目的：利用原核重组表遮技术 完成人可络 肿擅坏死p习子相关凋亡诱导配体 (TRAIl，又称凋亡素2配体 ， Apo2I)的中试 方法 ：可溶性 TRAII编码基 因插人改建 的pBV230载体 {在发酵过程 中 控制溶解氧在30 ～50 鲫C生 长6h一42(涛导培养 4h；菌体上清行盘属亲和层析 结果 ：发酵液 中最终菌体密度 D(600)达 8．0(相当于每升发酵液含 15g 湿菌体1．IRAII 占菌体总蛋 白的40 左右一含量超过 0．6g／I。其中．所表达 的 IRAII20 ～3O 在上清而直接有活性 ． 70 ～80 呈包涵体 。上清用亲和层析一步使其纯度达 ?0 以上；包涵体超声破菌后经两次洗涤 纯度达到8O 以上。 结 论 ：IRAl1在大肠杆菌 中达到了高表达 L美键词] 肿瘤坏死 因子相关凋亡诱导配体 ；重组蛋 白质 ：发酵 ；分批补料 [中囤分类号] Q786~Q920．【 [文献标识码] A Ut章编号] 0258879X(2002)02—0132一O4 Higherdensityfermentation inpreparationofrecombinantsolublehum anTRAIL WANG Iiang-Hua，ZHU YuPing Lt)lIYong—Hua ZHOU JinSong ，PENG YuZhen ，QIU Y ，JIAO BingHua (】 DepartmentofBiochemistryandhlo[eeularBio[ogy，DepartmentofBasicMedicine，SecondMihtaryMedicalUniversity， Shanghai200433 China；2．ShanghaiQia’erBiotechno[ogy lnc．) [AUSTRACr[ Objective：Topreparerecombinant1。RAI1byhigherdenstycuhivationofE．col1Kg02／pBV-TRAIIina3． 7IBioengineering fermentertooverexpressrecomhinantsotubte humanTNF reLated apoptosisi‘nducingligand (TRAII， Apo2[igand，Ape2[)．M ethods：ThegeneofTRAI1．code insertedintorebuiltpBV220 A feeding—in—batchprocesswas usedtoLimitg[ucoseatlow [eve[andkeepdissolvedoxygenat30 50 ；thebacteriagrew at30C for6handraisedto42C in 】5rain for4 h．TRAI1．wasisolated frontthesupernatantof1oacteria byimmohihzed metalaffinitychromatography IMAC ．Results：Thebacteria1~,-erereproduced inalargesca[eacthefina1celldensityofD (600)= 8 (approximately15g wetweight．I)．ExpressedTRAIIaccountedforaboul{Ooftotalbacterialpro*ein wbicbrepresen*edfor0．6g．／Loffinal