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[农学]植物组培快繁程序 .ppt
三、培养 指把离体植物材料放在培养室(有光照、温度条件)里,使之生长,分裂和分化形成愈伤组织或进一步分化成再生植株的过程。 2、培养方法 (1)固体培养法 即用琼脂固化培养基来培养植物材料的方法。是现在最常用的方法。虽然该方法设备简单,易行,但养分分布不均,生长速度不均衡,并常有褐化中毒现象发生。 (2)液体培养法 即用不加固化剂的液体培养基培养植物材料的方法。由于液体中氧气含量较少,所以通常需要通过搅动或振动培养液的方法以确保氧气的供给,采用往复式摇床或旋转式摇床进行培养,其速度一般为50~100r/min,这种定期浸没的方法,既能使培养基均一,又能保证氧气的供给。 高温且恒温? 高湿? 弱光? 无菌 1、试管苗生态环境与自然环境的差异 ▼ 2、试管苗的特点 生长细弱,角质层不发达 光合作用差 叶片气孔数少,活性差 根吸收功能弱 对逆境的适应性和抵抗能力较差 3、试管苗的驯化 目的:提高试管苗的适应性,促其健壮, 最终提高移栽成活率 原则: ★从温、光、湿度及有无杂菌等环境因素考虑。 ★驯化开始数天内,与培养环境条件相似;后期与预计栽培条件相似,逐步适应。 方法:即炼苗。不开口自然光下2-3天,然 后开口1-2天。 试管苗的移栽方法Ⅰ 组培驯化移栽常用基质 脱分化 分 化 愈伤组织 芽、芽丛 切割芽丛 继代培养 大量芽丛 试管苗 生根培养 外植体 初 代 继 代 器官发生型Ⅱ ① ② 愈伤组织培养 愈伤组织 具分裂能力的细胞 已分化细胞 脱分化 继 代 愈伤组织 分 裂 诱导期 分裂期 分化期 愈伤组织诱导 ◆ 双子叶植物单子叶植物和裸子植物 ◆ 幼年细胞和组织成年细胞和组织 ◆ 二倍体细胞单倍体细胞 ◆ 根据培养目的选取外植体 愈伤组织诱导 ◆ 外植体大小一般为0.5cm的圆柱形或方形块 ◆ 添加植调剂和天然提取物利于诱导和维持 ◆ 生长旺盛的愈伤组织一般呈乳黄色或白色或浅绿色或绿色,老化的多为黄色或褐色 脱分化因植物种类、器官及生理状况有大差异: ◆禾谷类植物脱分化较难。 ◆细嫩组织脱分化较易;成熟组织较难。 ◆花器脱分化较易;茎叶难。 诱导期 ◆诱导期长短与植物种类、生理状态有关。 ◆诱导期长短与环境因素有关。 母株生长在弱光下的外植体易于诱导,分裂频率高。 增加O2和迅速释放CO2利于细胞分裂。 ◆添加植调剂诱导分裂效果好。 ◆合成代谢迅速。 分裂期 特征: 细胞分裂快,结构疏松,缺少有组织的结构,颜色浅而透明。 分化期 特征: 形成瘤状结构的外表和内部分化;出现多种类型的细胞。 石龙芮下胚轴培养产生胚状体过程 体细胞胚状体发生型Ⅰ 外 植 体 愈伤组织 小孢子 游离单细胞 器 官 胚 状 体 试 管 苗 体细胞胚状体发生型Ⅱ 胚状体形成植株的特征: 1.具两极性 2.胚状体的维管组织与外植体的维管组织无解剖结构上的联系 3.胚状体的维管组织的分布是独立的“Y”形 4.数量多,速度快,结构完整,成苗率高 原球茎:缩短的、呈珠粒状的、由胚性细胞组成的、类似嫩茎的器官。 原球茎发生型 1.初代培养时外植体发育途径有几条? 2.正常的愈伤组织一般为何种颜色?其诱导有何特点? 思考题: 目的:扩繁无根苗(生产上边扩繁边生根)。 扩繁方法:以几何级数增加,可切割茎段,分离芽丛、胚状体、原球茎。 培养基:基本培养基或分化培养基 实质:增殖培养物。 (2)继代培养 (3)壮苗和生根培养 ◆生根培养基:1/2或1/4MS基本培养基;不加或少加CTK,适量添加NAA;糖浓度1-1.5%。 ◆培养条件:增加光强,达3000-10000lx。 ◆壮苗 ◆生根方法与途径 ①新梢基部浸入50或100ppmIBA液4-8h; ②在含IAA类培养基中培养4-6d; ③移入含活性碳的生根培养基培养。 ⑤其它方法 ④生根困难的则在培养基中搭滤纸桥或按① 生根其它方法 ◇延长在增殖培养时间 ◇降低增殖倍率,减少CTK用量 ◇对易生根植物,切割粗壮嫩枝在营养钵中直接生根 ◇胚状体发育成小苗不经生根阶段,但需壮苗生根 接种只是完成了离体培养的第一步,植物离体培养和栽培植物一样,生长过程中也受到各种环境因素的影响。培养条件是离体培养能否成功的关键。在培养基条件适宜的基础上,影响试管苗生长的主要因素有光照、温度、湿度、氧气。 (4)培养条件 光照 1)光强 ★影响外植体细胞的增殖、组织和器官的分化。一般培养室的光照强度要求1000~5000lx。 ★愈伤组织的诱导有的在光照下有促进作用;光照强,幼苗生长健壮;光照弱,幼苗生长弱小,容易徒长。 ★不同波长的
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