牙鲆5个养殖群体遗传多样性分析.pdfVIP

第四章 鱼类养殖技术 第一节 牙鲆5个养殖群体的遗传多样性分析 牙鲆(Paralichthysolivaceus)是我国主要海产经济鱼类，主要分布于渤海、黄海以及东海 海域。牙鲆个体大，生长快，味道鲜美，是深受人们欢迎的鱼类。 由于牙鲆经济价值较高，北方沿海人T养殖发展迅速，已经成为主要养殖对象。各养殖 场大多从海上捕捞野生亲鱼，经培育后采卵获得后代，有的养殖场从自养群体中挑选个体大 的留作亲鱼，有的养殖场每年从海中补充一部分野生亲鱼。尽管如此，养殖场的亲鱼数量也 是有限的。容易造成后代杂合度降低和等位基因频率变化，特别是稀有等位基冈缺失，而使 群体种质下降，性状退化。这磐问题已经引起人们的充分注意。日本学者Sekino采用微卫 星和mtDNA2种DNA分子标记对日本的牙鲆野生群体和养殖群体进行了系统的研究…。 国内学者对牙鲆的群体遗传学研究主要采用同工酶、RAPD和微卫星等技术手段，集中于自 然群体和养殖群体的比较拉。J，针对养殖群体的研究仅见同工酶方面的报道[5J。关于北方 各地牙鲆养殖群体遗传差异的研究尚未见诸报道。 本研究选择了北方沿海5个重要养殖场作为研究对象，采用微卫星分子标记技术分析 其养殖群体的遗传结构和背景现状，以期为牙鲆种质资源保护、养殖群体遗传改良及良种选 育等提供依据。 一、材料与方法 (一)样品采集与DNA提取 本研究选择北方养殖历史较久，依靠自产苗种的5个养殖场作为本研究的取样地点 (表4一I)。采样时间为2004年I1月至2005年1月，样品均为各养殖场的I龄鱼，其亲本 多为各地野生牙鲆与其自繁后代的混合体，全长9．6～39cm，体质量6．37～610g，每组样本 数量30尾。剪取尾鳍鳍条分装于液氮中，到达实验室后置于一80℃中保存。DNA提取参 照邹曙明等的方法∞J。 表4—1牙鲆样本来源 群体 来源 北戴河 中国水产科学研究院北戴河中心实验站(白育苗) 丹东 东港华正水产有限公司(自育苗) 威海 山东华新海大海洋牛物股份有限公司(自育苗) 荣成 山东好当家集团有限公司(自育苗) 青岛 中国水产科学研究院黄海水产研究所小麦岛试验基地(自育苗) 190 海水养殖业的可持续发展——挑战与对策 (二)PCR反应及电泳结果分析 为CA重复。为了更好地反映样本的遗传结构，根据牙鲆的遗传连锁图剖8o选取了另外2 个连锁群的微卫星引物，从GenBank获得引物序列。各位点引物序列，连锁群及特异退火 温度见表4—2。 表4—2引物序列。连锁群及特异退火温度 +引物序列从GenBank获得 第四章 鱼类养殖技术 19l 2．5 PCR反应体系为25斗L，包括10×bufferILL、M92+(25 2 ng)、TaqDNA聚合酶 mmol／L)l斗L、上下游引物(10pLmol／L)各1斗L、模版l止(30～50 30s，35 lU，加适量ddH20。反应程序为：94。C预变性3min，94。C30s，57～620C30s，720C 个循环，最后72。C延伸10 2％琼脂糖凝胶电泳，内含有1／20体积的Goldview，浓度为10 mg／L。用GDS8000凝胶成像 仪照相，扩增产物片段大小由Gel．ProAnalyzer4．5凝胶分析软件分析。 (三)数据分析 计算了5个养殖群体在16个微卫星位点上的平均等位基因数(A)、