应用高压冷冻技术的研究番茄斑萎病毒侵染普通烟的超微结构.pdfVIP

电f＆微々搬JChinE]eetr……cs。c 92 Ⅵ182一I2010年 应用高压冷冻技术研究番茄斑萎病毒 侵染普通烟的超微结构 洪健1，盂春梅‘，祝建2，张仲凯3，周雪平‘ 3女南省生物技术与种质资鼎研究所．i南昆明650223) 832删CCD相机记求图象。 高压冷冻一砖球置换技术(I[PF-FS)是近年发透射电镜下观察，Gatan 展起来的电镜生物样品处理技术．可蹦型有效地保 2结果与讨论 存细胞原始生活状态．克眼传统化学固定带来的人 经HPF-FS处理、常温包埋的TSWV感前叶片， HPF 1．假象。我们应JIi FS研究了植物病毒侵染寄 电镜观察看到超微结构保存完好、反莽细腻。细胞 主细胞的赶礅结构，发现r一些在化学处理制备样 核丰满，双层核膜清晰．细胞壁与细胞质之间边界清 品十束能观察到的结构细节这些结构可能更真实 晰，质膜平精忻完整．细胞质中横糖体及其他内台物 地反映，精毒与寄主的相互作用茭系。水文撤道番 丰富。TSWV球形病毒粒子分加在膨大的内质刚池 茄斑萎病毒(TSWV)侵染普通娴的超微结构尘化。巾(剐I)，线粒体形态比较饱满，高尔基体结构保 1材料与方法 存良好．膜结构非常清晰，潴泡结构和分泌小泡丰 感染TSWV的普通烟(,～icotianatabacam)采自南；叶绿体形状比较饱满，青有低电于密度的嗜锇颗 浙江省农科院植保所养虫摩。用TSWV机体试剂粒，蘑粒和甚质片层排州呈疏松状态。在细胞壁E 盒进行ELISA检测旱阳性反应，确定病毒种类无脱察到1f『管状结构穿越的现象(图2)，々以往所见 误。将病Ⅱ|_切成I…2mm的小片，用25％戊 的胞闻连筵鸟!i构不尽相同，化学固定的病叶样品细 二醛和I％四氧化锇常规双固定、乙醇梯度脱水， 胞收缩判显．紧靠细胞壁帕质膜几乎都存在栅皱现 Epon8l2树脂包埋。高压玲冻样品先川直径2mm 象．有的呈质壁分离。病毒粒干分寄存内质网池中， 的打孔器将病叶分割成小H后，欣^斜制史艋巾，川 但肴币到细胞壁r的昔状结椅。叶绿体大都收缩成 1 hexad州凯*填亢，用另一平底槲艇盖住后置于冷幢状结构，摹质的rUr符鹰降低。线粒捧结构也有 磙固定夹中．插^HPM100高压冷∞、仪中进行冷球 收鳙，高尔基体铜当少见．潴泡结构和分泌小泡少。 固定。固定后的样品置于I％降阴氧化锇一丙酮液 r述观察结粜显爪rHPF-FS方法处理的样品 巾，在EMAFS冷冻置换仪巾一90℃，一60℃日】能够更真宴地展现感病植物细胞的超微结构变化， 一30℃分别停留8h．置换m细胞中的水分，同时使 特别是细胞壁r的管状结构在化学附定样品中始终 样品宽分固定，在0℃F停留1h，用纯阿酮换洗2 未能见到．叮能是与抽雌胞间运动相关的一个重要 5 2树脂包埋。超薄 结构， 次，每次1 min。最后用Epon8I 切片用醋酸双氧钠和柠檬酸铅双染色．在H4650型参考文献(略) 目1分市mⅫ胞质^质月池t}l的鹅wV＆f 目2目№％L的管状结构