周期性麻痹的相关基因突变与功能研究.pdfVIP

2QQ垦笙j匕京地区神经凼抖堂本笙会 周期性麻痹的相关基因突变和功能研究 中国人民解放军总医院神经内科 吴卫平郭秀海柯青 吴磊毛燕玲刘洁晓颜光涛 解放军总医院基础所生化室 李泱 (解放军总医院老年心血管病研究所) 周期性麻痹属离子通道病，为离子通道基因突变引起其功能异常所致，我们对三种类型的周期性麻痹患者的钠 通道、钙通道硐J钾通道的基因突变进行了研究，并对新发现的基因突变进行了功能研究。 一、家族性高钾型周期性麻痹的SCN4A基因突变研究 临床资料：性别M／F=6／8，发病年龄：4—8Y(6岁±2岁) 发作持续时间：数分钟～7D，症状严晕程度： 轻感易疲劳一不能起床，肌无力分布： 下肢较上肢重，近端 较远端重，可不对称；诱发因素： 剧烈运动、季节更替、寒冷：治疗： 口服淡盐水、生理盐水静滴、乙酰唑 胺；伴随症状： 无肌强直、感觉异常。 结果： hyperl(PP家系由Thr704Met突变引起，无肌强直。 二、正常血钾型周期性麻痹患者sCN4A基因突变研究 (一)临床资料：性别：M／F=8／lO；年龄：寿命无影响；发病年龄卜3lY；发作持续时间：卜20D：症状 严重程度：轻感易疲劳一不能起床：肌无力分布： 下肢较上肢重，近端较远端重，可不对称诱发因素： 剧烈 运动、季节更替、寒冷；家族史： 3有8无；治疗：口服淡盐水、生理盐水静滴、乙酰唑胺；伴随症状： 无肌 强直、无感觉异常。 (二)结果： 发现的新突变R675Q可能导致no瑚ol(PP。 同的突变。 (5)部分nomol(PP存在特有突变?也可由其它原因引起。 三、低钾型周期性麻痹的基因突变与临床特征研究 在1种新的有意突变：SCN4A基因的V78lI突变。 常亲属无此突变。此突变临床和遗传学特征：儿童期发病；青春期加重：成人后减轻，未出现持久性肌无力表现； 乙酰唑胺治疗有效；突变基因携带者完全外显率，男女均发病；无遗传早现。 发现5个无症状者突变基因携带者，其中l例男性(17岁)，另外4例为女性(最小年龄36岁)。此突变临床和遗传学特 征：多在青春期发病；成人后减轻，无持久性肌无力表现；乙酰唑胺治疗无效，可有加重趋势；男性突变基因携带 者外显率83％，女性突变基冈携带者不外显：存舟遗传早现。 6 大会专题报告 (二)s洲4A基因V781 此家系所有患者存在此突变，且4例正常亲属也携带此突变(其中1例男性和3例女性)。我们找到一个鉴别正常序 多态。 (三)散发性低钾型周期性麻痹相关基因突变的研究：基于我们对FH0印P进行的基囚突变筛查，并未在已报道 突变。 四、周期性麻痹SCN4A基因新突变R675Q的功能研究 法转染圈(一293细胞，研究突变钠电流的电生理特点，进一步解释周期性麻痹的发病机制，为从分子水平诊断和更 有效的治疗本病打下基础。 (二)方法：设计带突变位点的引物，以含有人骨骼肌钠离子通道cDNA的质粒为模板体外定点诱变，构建R675Q 突变型人骨骼肌钠离子通道真核表达载体。质粒大提取试剂盒抽提、纯化质粒后脂质体瞬时转染到HEK一293细胞 质粒后24h全细胞记录钠通道的门控特点。 (三)结果： 1．测序证实pRcCMv—R675Q-SCN4A在相应位点有突变。 0．57±0．06，转染后48h为1．15±0．04；转染后目的蛋白表达量显著增加(pO．01)。 3．野生型(widetype 特点和盯型相似，快速失活及恢复时间常数‘的统计学处理无显著差异。R675Q钠通道的快速激活的电压电导(G-V) 曲线V1／2相对wT钠通道向去极化方向移动约7mv，统计学处理有显著差异(pO．01)。 cP)后细胞慢失活电流达到稳态，可以得到慢失活的电压依赖性特点。 4．40s预刺激(conditioningpulse 9TIlv。 R675Q慢失活明显提高，其电压依赖性曲线较WT