失眠大鼠脑干GAT-1表达变化.pdfVIP

基础研究 第六届中国睡眠医学论坛论文汇编 失眠大鼠脑干GAT-I表达的变化 邹艳群蔺芳菊杨德杨晓苏 {中南大学湘雅医院神经内科) 摘要： 【研究背景】失眠(insomnia)是最常见的睡眠障碍(sleepdisorders，SD)，是多种躯体、精神 和行为疾病所具有的常见临床表现，长期失眠会给人的正常生活和工作带来严重的不利影响，甚 至会造成严重的意外事故。但其发生的确切机制目前仍不明了。 觉醒与睡眠周期的调节主要与脑干的网状结构有关，其中有睡眠诱导功能的上行网状抑制系 reticular reticular 统(ascendinginhibitorysystem，ARIS)和上行网状激动系统(ascendingactivating system，ARAS)的动态平衡决定着睡眠．觉醒周期的变化。 acid，GABA)是哺乳动物中枢神经系统中最主要的抑制性 Y．氨基丁酸(gama．aminobutyric 神经递质。GABA与GABAA受体的结合使氯离子(chloride ion，CI‘)通道开放的频率增加，大 量Cl。流入细胞膜内，引起突触膜超极化，产生抑制性突触后电位(inhibitorypostsynapticpotential， IPSP)而发挥神经抑制功能。 acid GABA转运体(gama．aminobutyric GAT在脑组织内分布广泛，能摄取突触间隙及细胞外液的GABA，终止GABA的抑制作用，与生 理病理过程关系密切。GAT表达的异常会导致GABA能神经信号传递的变化，进而导致临床上多 种神经系统疾病。在神经系统发育、癫痫、精神分裂等诸多生理病理条件下，广泛存在GAT的变化。 提示GAT通过影响GABA能神经元，在神经兴奋／抑制的平衡中扮演着重要的角色，而失眠正是 一种神经兴奋／抑制功能失衡导致的临床疾病。 地西泮(安定)是治疗失眠的经典药物，属苯二氮卓受体激动剂，通过促进GABA与 GABAA受体的结合而发挥神经抑制功能。在失眠及其治疗的过程中，GAT-1会发生怎样的同步变 化，目前国内外尚未见相关报道。 模型，并同步设立生理盐水对照组和地西泮干预组，检测大鼠脑干组织中GAT-ImRNA和GAT-I 蛋白的表达变化，初步探讨其与失眠的关系，以寻找临床治疗失眠的新靶点。 【方法l1．动物分组及处理：采用清洁级健康成年雄性SpragueDawley大鼠为实验对象，共 36只，体重180～2209。随机分为模型组、对照组和干预组三组，每组12只动物。①模型组：每 ．13． 基础研究 第六届中国睡眠医学论坛论文汇编 三天以蒸馏水按lmlJlOOg灌胃，连续5天；③干预组：同模型组腹腔注射PCPA建立失眠模型之后， 蒸馏水溶解，按lml／1009配制成水溶液。 2．实验动物行为学观察及体重测量：每天定时观察大鼠行为学表现，每3小时录制大鼠活动 视频半小时，纵横双向比较大鼠行为学的改变。分别于入组时、第一次腹腔注射PCPA前、第一 次灌胃前及处死大鼠取材前当天上午8：00—8：20测量所有大鼠体重并记录。 3．将各组受试动物于开始灌胃治疗后第6天快速断头处死，取大鼠脑干组织，超低温保存。 4．RT-PCR法和WB法检测大鼠脑干GAT-I的表达。 【结果l1．大鼠行为学表现：对照组大鼠无明显变化。模型组和干预组大鼠于第一次腹腔注 大鼠地西泮灌胃后失眠症状较模型组均逐渐恢复。 2．体重变化：入组时、第一次腹腔注射PCPA前三组大鼠体重相当I第一次灌胃前模型组和 I 干预组体重相当，但较对照组均