细胞工程期中全..docVIP

第一篇、细胞工程的技术基础 绪论 ▲1、细胞工程：是以生物细胞或组织为研究对象，运用细胞生物学，分子生物学，工程学的原理、试验方法或技术，在细胞水平上研究改造生物遗传特性和生物学特征，以获得特定的细胞、细胞产品或新生物体的有关理论和技术方法的学科。 2、细胞培养、组织培养（体外培养）：是指生物细胞和组织在离体条件下的生长和增殖。 3、细胞核移植：是利用显微操作技术将细胞核与细胞质分离，然后再将不同来源的核与质重组，形成杂合细胞的过程。 ▲4、干细胞：是动物体内具有分化潜能、并能自我更新的细胞，分为胚胎和组织干细胞。 ▲5、单克隆抗体：是由识别一种抗原决定簇的细胞所产生的均一性抗体 第一章、细胞培养的设施与基本条件 1、培养用器皿：培养皿、培养瓶、培养板。 2、生物安全：生物技术的研究、应用以及生物技术产品的研究、开发、商品化生产过程中发生的可能危及生物多样性、环境和人类健康的安全问题。 3、实验室生物安全：在进行细胞与组织的培养，尤其是含有病原的生物材料的培养时，保证培养物不受污染及培养物不会对实验人员和环境造成污染的安全问题。 第二章、清洗与消毒 1、消毒方法：物理灭菌法（紫外线消毒、电离辐射消毒、湿热消毒、干热消毒、过滤消毒）；化学消毒法（75%酒精、甲醛伏和磺酊、过氧乙酸、来苏尔）。 第三章、细胞培养的基本方法 1、细胞周期的时间测定方法：同位素标记测定法、流式细胞仪测定法。 2、细胞培养过程中的污染包括：微生物（细菌、真菌、支原体和病毒）、化学物（影响细胞生存的非细胞所需的化学成分）、细胞（非同种的其他细胞）。 3、MTT比色法测定细胞活力：（色度OD↑，活力↑）； 细胞活力测定方法：血球记数板（人工）、流式细胞仪（自动）。 第二篇、动物细胞工程 第四章、细胞培养 1、培养细胞的生长特点：贴附、接触抑制、密度抑制。 2、原代培养期（初代培养期）：指从体内分离组织接种培养到第一次传代的阶段； 特点：细胞移动比较活跃，细胞分裂但不旺盛，是药物测试很好的对象。 传代：将原代细胞分开至多个新的培养瓶中的过程。 ▲细胞系：初代培养细胞经过第一次传代后的细胞（有限细胞系和无限细胞系）。 特点：此过程持续时间最长，细胞增殖旺盛，维持二倍体核型。 ▲3、细胞株：从一个经过生物学鉴定的细胞群中筛选出来的单个细胞增殖形成的细胞群，即通过克隆法得到的细胞群体。 衰退期细胞特点：细胞仍然生长，但不增殖或增殖很慢，最后衰退死亡。 3、接触抑制：由细胞接触而抑制细胞运动的现象；区别正常细胞与癌细胞的标志之一。 5、细胞周期：是指一个母细胞分裂结束后形成的细胞至下一个再分裂结束形成两个子细胞的时期；包括——G1期、S期、G2期和M期。 ▲6、培养基营养成分：氨基酸、单糖、维生素、其他成分。 7、天然培养基包括：生物性液体（如血清）、组织浸液（如胚胎浸液）、凝固剂（如血浆等）； 8、合成培养基：是在研究和了解细胞所需成分基础上，通过人工设计，配置而成的培养基。 ▲9、无血清培养基：指不需添加血清就可维持细胞在体外较长时间生长繁殖的合成培养基。 无血清培养基包括：基础培养液、添加组分两大部分。 无血清培养基的优点： ①供应充足，货源充足； ②产品成分简单，易于纯化； ③提高了细胞培养的可重复性； ④减少了血清中蛋白对某些生物测定的干扰。 ⑤避免了血清批次对实验的影响； ⑥避免了血清中带有的菌或毒素对细胞培养的毒性作用； 意义：虽然血清可以提供细胞增殖生长的生长因子促进DNA的合成，从而促进细胞增殖，但其成分十分复杂，在许多基础理论研究中若使用血清培养基，肯能带来错误的实验结果，尤其是血清中含有一定数量的毒素和抑制剂以及对细胞有去分化作用的成分，影响细胞功能的表达，因此，许多实验研究，比如生长因子实验、单克隆抗体制备、细胞分泌物的实验都要利用无血清培养基。 10、原代培养（初代培养）：是从体内分离组织接种到第一代传代的这个阶段； 11、防止凝血用——肝素、柠檬酸钠。 ▲12、分散组织的方法：机械法（离心法、切割法、机械分散法）； 消化法（胰蛋白酶消化法、胶原酶消化法、螯合剂消化法）。 13、细胞培养方法：组织块培养方法、单层细胞培养、悬浮细胞培养。 ▲14、克隆培养法：又称作单细胞分离培养法，就是将从细胞悬液中获得的单个细胞用于培养，使之重新繁衍成一个新的细胞群体的培养技术。 ▲15、饲养细胞：为了促使刚刚克隆化的极少量细胞生长、繁殖，在培养皿中加入能贴壁生长的其他细胞。 16、单克隆抗体技术：把能够产生单一抗体的淋巴细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞在体外融合成杂交瘤细胞，能无限增殖并且产生抗体，经过体外体内培养用于生产单克隆抗体的技术。 第五章、细胞融合与单克隆抗体 1、细胞融合：是指在离体条件下用人工方法将不同种生物或同