应用X精子冷冻精液生产体内性控胚胎的试验研究进展.pdfVIP

*昆中国奶业科技发展论坛论文集 OF FORUM DAIRYIN[XfiIRY 日，崮PlK)C_王K)tNl35THERi苍-l ON洲NEsE SO-INN晰10P~哪 应用X精子冷冻精液生产体内 性控胚胎的试验研究进展 黄 河1，李 鑫1，扈长春1，胡莉萍2 (I．青岛六和牧业发展有限公司，即墨266225； 2．山东省畜牧兽医总站，济南 250022) 摘要：应用x精子冷冻精液对75头超排供体母牛进行2—3次(3～4支细管)输精，共采 集胚胎633枚，其中可用胚383枚，退化胚135枚，未受精卵159枚。胚胎的受精率为81．8％ 枚。输二次精3支细管，与输三支精4支细管，均可获得同样的胚胎采集效果。应用LAMP 法对61枚胚胎进行性别鉴定后，确定雌性胚胎比例为100％(61／61)。1l枚X精子冷冻精液 生产的体内性控冷冻胚胎移植后，怀孕率为63．6％(7／11)。因此，应用x精子冷冻精液对供 体母牛进行输精，不仅可获得与未分离冷冻精液输精后相接近的胚胎的数量和质量，而且移 植后可得到较高的怀孕率。应用X精子冷冻精液生产体内性控胚胎，可在我国胚胎移植技术 中大量推广应用。 关键词：奶牛性别控制；X精子冷冻精液；胚胎性别控制；胚胎性别鉴定 1前言 1．1奶牛性别控制的意义 性别控制一直是生物科学研究领域的一项重要课题，对畜牧业(尤其是养牛业)有着非常重要的 意义，它可以按照生产需求控制仔畜性别，以提高畜牧业生产的经济效率。美国Ewasaki等认为，20 世纪90年代美国在养牛业中若能采用性别控制技术，奶牛业每年可以增加1．8亿美元的收入，肉牛业 则可增加4．25亿美元的收入。在育种方面，通过性别控制可以增加选择家畜遗传和表型性别的强度， 加速育种进程。 性别控制技术的研究现状 制家畜后代的性别是人类一直梦寐以求的目标，目前性别控制技术主要有以下两个途径： 学术交流 1．2．1早期胚胎性别鉴定技术 通过鉴定早期胚胎的性别，以影响出生家畜的性别比例。从研究的范围和进展情况来看，主要 有以下几种胚胎性别鉴定的方法：细胞学方法、免疫学方法、分子生物学方法等。目前世界上多采 用分子生物学中的PCR扩增Y—DNA特异片段序列方法，这种方法灵敏度高，准确率达95％以上， 是目前国内外广泛应用于家畜(尤其是牛)的胚胎的性别鉴定，较为成熟和理想的胚胎性别鉴定 技术。 1．2．2卵子受精前的性别控制技术 主要是对x和Y二类精子进行分离和改变子宫的生理生化环境两方面进行研究，前者根据x、Y 精子在物理和化学性质上存在的一些微小差异，如密度、重量、形态、大小、活力、表面电荷、DNA 含量等，采用离心分离法、电泳分离法、H—Y抗体法、流式细胞分离法等对x、Y精子进行分离；后 者多采用向子宫内宫注某些溶液，以抑制Y精子的方法。 2 X精子的分离原理、效率和纯度 目前认为最科学和最可靠的分离精子的方法是根据x和Y精子的DNA含量存在差异为依据，利用 改良的流式细胞分离仪分离X和Y精子。 出现差异，通过光电倍增管(PMT)探测荧光反射信号，根据反射光的强弱判别出x染色体精子和Y 染色体精子，并立即给X和Y精子分别赋予正负电荷，同时由于喷嘴产生高频率的震动，喷射出的液 柱也就形成一滴滴包含有x精子或者Y精子且带有正电荷或者负电荷的液滴，液滴的两旁分别放置正 电极和负电极。这样，携带不同电荷的液滴在电场作用力的引导下，落入左右两旁的收集容器中，X 精子和Y精子得以分离。 由于目前技术条件的限制，只有30％左右的精子通过流式细胞仪时能够准确地根据其荧光量的大 小而得到分离。残留在染色品样管中和校正喷嘴过程中丢失22％，定向不正确、信号重叠或死亡的精 子占43％，分离液滴飞溅出收集管外的、离心时残留在上清液中和装管过程丢失、残留的精子约为 5％，最终只分离到30％的精子，其中X和Y精子各占15％。 500～5 目前的精子分离速度可达每秒钟分离4 000个精子，通过对x染色体精子样品重新分离， 证明根据分离速率的不同