弧菌拮抗菌的筛选及其效果.pdfVIP

维普资讯 第 11卷第4期 中 国水 产 科 学 V01．11 No．4 2004年 7月 JournalofFisherySciencesofChina July 2004 弧菌拮抗菌的筛选及其效果 张新明 ，李 健 ，刘 淇 (1．中国水产科学研究院黄海水产研究所，山东青岛，266071；2．中国海洋大学 水产学院，山东青岛，266003) 摘要：从健康的鱼虾体内以及养殖水体中分离得到219株海洋细菌，以鳗弧菌 (m angu／／／arum)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、沙蚕弧菌(Vibrioneres~s)、飘浮弧菌(1~brionatriegen)等病原性弧菌为指示菌，在2216E平板上采用十 字交叉划线法、点种法和平板扩散法进行体外拈抗实验，从中筛选到6株有拈抗作用的海洋细菌。用平板活菌计数法研 究拮抗菌J一10及其胞外产物对鳗弧菌的抑菌作用；采用平板扩散法研究拮抗菌J一10胞外产物抑菌效果的影响因子。 结果显示，拮抗菌J一10在混合体系中，24h之后表现出拮抗作用，在第3天使鳗弧菌的数量降为最低，比第 1天的鳗弧 菌数量下降了2个数量级，之后鳗弧菌的数量开始上升，而对照组鳗弧菌的数量在第2—5天基本维持第 1天的水平，表 明拮抗菌J—l0在混合体系中具有较强的拮抗作用。拮抗菌J—l0的胞外产物能较好地抑制鳗弧菌的生长，使实验组的 弧菌数量在3h降为最低，之后呈缓慢上升的趋势，而对照组则一直呈上升的趋势；拮抗菌J一10的胞外产物对热敏感， 对pH的变化不敏感，对蛋白酶K不敏感，Fe”的添加会减弱其抑菌活性。根据形态特征和常规生理生化反应进行鉴 定，J一1O为藤黄微球菌(Micrococcusleteus)o 关键词：拮抗菌；筛选；藤黄微球菌；抑菌活性；胞外产物 中图分类号：Q939．92；Q938．1 文献标识码 ：A 文章编号：1005—8737一(2004)04—0325—08 近年来，一些益生菌开始应用于水产养殖业，实 据。 践证明应用益生菌来防治鱼虾疾病是可行的¨ 。 1 材料和方法 GatesoupeL4研究发现，将乳酸菌应用于大菱鲆 (Scophthalmusmaximus)幼苗培育中能增强幼苗对 1．1 实验菌株的来源及培养 病原性弧菌的抵抗力。Austin等…报道了1株溶藻 1．1．1 实验菌株 从健康的养殖鱼虾体和养殖环 胶弧菌对杀鲑气单胞菌 (Aeromonassalmonicida)和 境共分离到219株菌作为体外拮抗实验的实验菌 鳗弧菌 ( angu~larum)均有较强 的抑制作用。 株。 Riquelme等 研究发现，将 1株弧菌属细菌(V／bro／ 1．1．2 病原性指示菌 实验所用4株病原性指示 sp．)应用于扇贝育苗，通过抑制水体鳗弧菌和其他 菌分别为：飘浮弧菌 1594(Vb／ro／natriegen)和沙蚕 病原菌，提高了扇贝幼苗的成活率，并且认为具有拮 弧菌 1623(Vb／r／oneresis)来源于中国海洋大学浯0溶 抗活性的细菌在生物控制方面均有潜在的应用价 血弧菌1614(V／bro／parahaemolyticus)来源于中国科 值。Smith等 报道，用 1株假单胞菌(Pseudomonas 学院水生生物研究所。鳗弧菌(Vibrioanguillarum) ∞船ce，)浸浴减少了大西洋鲑疖疮病的发生，并 H一2由本实验室从山东海阳海珍品养殖场发病牙 使其死亡率降低。 鲆中分离筛选并鉴定，经人工攻毒试验证明其具有 本研究从养殖环境及鱼虾体内分离筛选出对病 较强的毒性。 原性弧菌有拮抗作用的海洋细菌，对其进行了菌种 以上菌株均用2216E海水琼脂培养基常规培 鉴定，并对拮抗菌 J一10的胞外产物对鳗弧菌的抑 养。 菌作用及其影响因子进行了研究，以期为细菌J一